Orientador: Yong Kun Park

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos

Resumo: Uma linhagem de Bacillus lentus, contendo alta atividade de ciclodextrina glicosiltransferase (E.C. 2.4.1.19) extracelular, foi obtida de uma coleção de microrganismos isolados de amostras de solos de Campinas (SP), usando-se um meio de cultivo alcalino, A enzima foi produzida cultivando-se...

Resumo: Uma linhagem de Bacillus lentus, contendo alta atividade de ciclodextrina glicosiltransferase (E.C. 2.4.1.19) extracelular, foi obtida de uma coleção de microrganismos isolados de amostras de solos de Campinas (SP), usando-se um meio de cultivo alcalino, A enzima foi produzida cultivando-se o Bacillus lentus em meio líquido (pH 10,3) a 37°C por 4 dias, em aerobiose. A ciclodextrina glicosiltransferase foi purificada por fracionamento com sulfato de amônio, seguido de cromatografia em DEAE e CM-celulose. A enzima foi purificada 378 vezes. O pH ótimo da enzima purificada ficou entre 5,8 a 6,2 para a atividade dextrinisante, e entre 6,5 a 7,5 para a formação de cicladextrinas. A temperatura ótima para formação de ciclodextrinas situou-se entre 45 e 55°C. A enzima permanecia estável até 55°C por 30min de aquecimento em pH 7,5, e a estabilidade térmica era aumentada mediante a adição de 10mH de CaCl2 . O peso molecular foi estimado em 33.000, por filtração em gel SEPHABEX G-200. A análise das cicladentrinas por Cromatografia Liquida de Alta Eficiência (CLAE), mostrou uma proporção de 1:67:1,6 para a, ß e ý-ciclodextrina, respectivamente

Abstract: One strain of Bacillus lentus, having the highest extracellular cyclodextrin glycosyltransferase (E.G. 2.4.1.19) activity, was selected after a screening of microorganisms obtained from soil of the Campinas(SP) area, using alkalophilic culture medium. The enzyme was produced from Bacillus...

Abstract: One strain of Bacillus lentus, having the highest extracellular cyclodextrin glycosyltransferase (E.G. 2.4.1.19) activity, was selected after a screening of microorganisms obtained from soil of the Campinas(SP) area, using alkalophilic culture medium. The enzyme was produced from Bacillus lentus in a liquid culture medium after 4 days at pH 10.3, at 37°C, under aeration. The extracellular cyclodextrin glycosyltransferase was purified through ammonium sulfate fractionation, followed by DEAE and CM cellulose column chromatography . A 378-fold purified enzyme was obtained . The optimum pH ranges for the purified enzyme were 5.8 to 6.2 and 6.5 to 7.5 considering dextrinizing activity and cyclodextrin formation, respectively. The optimum temperature range for the formation of cyclodextrin was from 45 to 55°C. The enzyme was stable for 30min. at 55°C at pH 7.5, and the stability was increased further by addition of 10mM CaCl2 . A molecular weight of 33.000 for the purified enzyme was obtained by Sephadex G-200 gel filtration. Analysis of cyclodextrins by High Perfomance Liquid Chromatography (HPLC) showed the presence of a, ß and ý forms in the ratio 1:67:1.6.