Efeito da concentração plaquetaria na coleta e criopreservação dos concentrados de plaquetas "secas" obtidos por aferese
Evaldo Pasquini Landi
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP L234e
Campinas, SP : [s.n.], 2004.
105p. : il.
Orientador: Carmino Antonio de Souza
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Resumo: Introdução. A criopreservação dos concentrados de plaquetas pode ser de grande importância para a manutenção dos estoques de concentrados de plaquetas. No entanto, a criopreservação exige a adição e remoção do crioprotetor, o que toma a técnica trabalhosa e de custo elevado. Os concentrados...
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Resumo: Introdução. A criopreservação dos concentrados de plaquetas pode ser de grande importância para a manutenção dos estoques de concentrados de plaquetas. No entanto, a criopreservação exige a adição e remoção do crioprotetor, o que toma a técnica trabalhosa e de custo elevado. Os concentrados de plaquetas "secas" se caracterizam por apresentarem pequeno conteúdo plasmático. A criopreservação destes concentrados eliminaria a necessidade de centrifugação para remoção do plasma excedente antes da adição do crioprotetor. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da coleta por aférese e da criopreservação dos concentrados de plaquetas "secas" e a atividade do dimetilsulfóxido (DMSO) 5% e 2% com inibidores da segunda resposta celular (ThromboSol@)como substâncias crioprotetoras para os concentrados de plaquetas "secas". Material e Métodos. Foram coletadas 28 unidades de concentrados de plaquetas convencionais e "secas", utilizando o mesmo procedimento de aférese para cada coleta. Amostras dos respectivos concentrados foram obtidas para análise microbiológica, contagem de leucócitos, contagem plaquetária, detenninação do volume plaquetário médio, do pH e dos
níveis de glicose e DHL. Para avaliar a ocorrência de ativação plaquetária, foram estudados por citometria de fluxo, o complexo GPlb (CD42b), a integrina allbf33 (CD41), a p-selectina (CD62p) e a ligação da anexina V. A avaliação funcional foi realizada por meio da agregação plaquetária com difosfato de adenosina (ADP), epinefrina, colágeno e ácido aracdônico. Após o descongelamento, foram colhidas
amostras para realização dos mesmos testes acima descritos. Os concentrados de plaquetas "secas" foram comparados aos concentrados de plaquetas convencionais por aférese e aos concentrados de plaquetas "secas" criopreservados, assim como o grupo de concentrados de plaquetas "secas" criopreservado com DMSO 5% foi comparado ao grupo criopreservado com ThromboSol@. Para análise estatística foi utilizado o teste de Wilcoxon pareado na comparação de bolsas do mesmo indivíduo,e não pareado, quando se tratava de indivíduos diferentes.Os resultados foram consideradossignificativos se p< 0,05. Resultados. Os concentrados de plaquetas "secas" apresentaram menor pH (p<0,001) e conteúdo de glicose (p<0,001), maiores níveis de DHL (p<0,001), maior porcentagem de plaquetas pselectina
positivas (p<0,001) e menor resposta agregatória com ADP (p<0,001) e epinefrina (p<0,001). A criopreservação ocasionou alterações morfológicas nas plaquetas e foi associada à maior ocorrência de lise, ativação e diminuição da resposta funcional. A criopreservação com ThromboSol@foi associada a maiores níveis de DHL (p<0,001) e à maior ligação da anexina V (p=0,005), além de menor
porcentagem de plaquetas CD42 positivas (p=0,01) e menor resposta agregatória ao colágeno (p=0,005). Conclusão. Este estudo sugere que os concentrados de plaquetas "secas" devem ser prontamente criopreservados após a coleta para evitar a redução do pH e a ocorrência de ativação plaquetária. A utilização de DMSO 5% ofereceu um efeito crioprotetor melhor ao do ThromboSol@ Ver menos
níveis de glicose e DHL. Para avaliar a ocorrência de ativação plaquetária, foram estudados por citometria de fluxo, o complexo GPlb (CD42b), a integrina allbf33 (CD41), a p-selectina (CD62p) e a ligação da anexina V. A avaliação funcional foi realizada por meio da agregação plaquetária com difosfato de adenosina (ADP), epinefrina, colágeno e ácido aracdônico. Após o descongelamento, foram colhidas
amostras para realização dos mesmos testes acima descritos. Os concentrados de plaquetas "secas" foram comparados aos concentrados de plaquetas convencionais por aférese e aos concentrados de plaquetas "secas" criopreservados, assim como o grupo de concentrados de plaquetas "secas" criopreservado com DMSO 5% foi comparado ao grupo criopreservado com ThromboSol@. Para análise estatística foi utilizado o teste de Wilcoxon pareado na comparação de bolsas do mesmo indivíduo,e não pareado, quando se tratava de indivíduos diferentes.Os resultados foram consideradossignificativos se p< 0,05. Resultados. Os concentrados de plaquetas "secas" apresentaram menor pH (p<0,001) e conteúdo de glicose (p<0,001), maiores níveis de DHL (p<0,001), maior porcentagem de plaquetas pselectina
positivas (p<0,001) e menor resposta agregatória com ADP (p<0,001) e epinefrina (p<0,001). A criopreservação ocasionou alterações morfológicas nas plaquetas e foi associada à maior ocorrência de lise, ativação e diminuição da resposta funcional. A criopreservação com ThromboSol@foi associada a maiores níveis de DHL (p<0,001) e à maior ligação da anexina V (p=0,005), além de menor
porcentagem de plaquetas CD42 positivas (p=0,01) e menor resposta agregatória ao colágeno (p=0,005). Conclusão. Este estudo sugere que os concentrados de plaquetas "secas" devem ser prontamente criopreservados após a coleta para evitar a redução do pH e a ocorrência de ativação plaquetária. A utilização de DMSO 5% ofereceu um efeito crioprotetor melhor ao do ThromboSol@ Ver menos
Abstract: Introduction. Longterm cryopreservationand banking of platelet concentrates (PCs) would provide a better storage management. Howeve r, cryopreservation requires the addition and posterior removal of a cryoprotective, making the procedure cumbersome and expensive. Ory PCs would provide a...
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Abstract: Introduction. Longterm cryopreservationand banking of platelet concentrates (PCs) would provide a better storage management. Howeve r, cryopreservation requires the addition and posterior removal of a cryoprotective, making the procedure cumbersome and expensive. Ory PCs would provide a plasma reduced component and fresh dry PCs could be cryopreserved in a dry condition, avoiding the
centrifugation required to remove excess plasma before adding the cryoprotective. The purpose of this study was to evaluate the effects of collecting and cryopreserving dry PCs and the activityof dymethyl sulfoxide (OMSO)5% and of OMSO2% plus second-messenger effector (ThromboSofTM)as cryopreserving solution for dry PCs. Material and Methods. 80th standard and dry PCs were collected in the same
apheresis procedure and samples were obtained for microbiologic control, leukocyte and platelet counts and mean platelet volume (MPV),pH, glucose and LOHlevels determination.Activationwas examined by flow cytometry using monoclonal antibodies directed against GPlb complex (CO42), allb~3 integrin (CO41) and pselectin (CO62p),alongwith annexin binding assay. Plateletfunction was assessed
by aggregation using adenosine diphosphate (AOP), collagen and arachidonic acid as agonists. Ory PCs were compared to apheresis standard PCs and to cryopreserved dry PCs. The cryoprotective effect of OMSO 5% was also compared to ThromboSolTM.Statistical analysis was performed by using a Wilcoxon signed rank test to test for significant differences between samplesfrom the same donor and a
. Wilcoxon ranksum test between samples from distinct donors. A p value < 0.05 was considered significant. Results. Ory PCs presented a significantly reduced>pH (p<O.OO1) and glucose (p<O.OO1), increased LDH levels (p<O.OO1) and CD62p expression (p<O.OO1),and diminished aggregation response to ADP (p<O.OO1)and epinephrine (p<O.OO1).Platelet cryopreservation was associated to platelet Iyses, activation and loss of function. Dry PCs cryopreserved with ThramboSolTM were associated to higher LDH levels (p<O.OO1)and annexin biding (p=O,OO5),and to lower CD42 positive platelets (p=O.O1)and aggregation response to collagen as agonist (p=O.OO5).Conclusion. This study suggest that dry PCs should be rapidly frazen after collection to avoid pH fali and platelet activation. In addition, it was observed that DMSO 5% demonstrated better performance than ThromboSolTM cryopreserving dry PCs Ver menos
centrifugation required to remove excess plasma before adding the cryoprotective. The purpose of this study was to evaluate the effects of collecting and cryopreserving dry PCs and the activityof dymethyl sulfoxide (OMSO)5% and of OMSO2% plus second-messenger effector (ThromboSofTM)as cryopreserving solution for dry PCs. Material and Methods. 80th standard and dry PCs were collected in the same
apheresis procedure and samples were obtained for microbiologic control, leukocyte and platelet counts and mean platelet volume (MPV),pH, glucose and LOHlevels determination.Activationwas examined by flow cytometry using monoclonal antibodies directed against GPlb complex (CO42), allb~3 integrin (CO41) and pselectin (CO62p),alongwith annexin binding assay. Plateletfunction was assessed
by aggregation using adenosine diphosphate (AOP), collagen and arachidonic acid as agonists. Ory PCs were compared to apheresis standard PCs and to cryopreserved dry PCs. The cryoprotective effect of OMSO 5% was also compared to ThromboSolTM.Statistical analysis was performed by using a Wilcoxon signed rank test to test for significant differences between samplesfrom the same donor and a
. Wilcoxon ranksum test between samples from distinct donors. A p value < 0.05 was considered significant. Results. Ory PCs presented a significantly reduced>pH (p<O.OO1) and glucose (p<O.OO1), increased LDH levels (p<O.OO1) and CD62p expression (p<O.OO1),and diminished aggregation response to ADP (p<O.OO1)and epinephrine (p<O.OO1).Platelet cryopreservation was associated to platelet Iyses, activation and loss of function. Dry PCs cryopreserved with ThramboSolTM were associated to higher LDH levels (p<O.OO1)and annexin biding (p=O,OO5),and to lower CD42 positive platelets (p=O.O1)and aggregation response to collagen as agonist (p=O.OO5).Conclusion. This study suggest that dry PCs should be rapidly frazen after collection to avoid pH fali and platelet activation. In addition, it was observed that DMSO 5% demonstrated better performance than ThromboSolTM cryopreserving dry PCs Ver menos
Efeito da concentração plaquetaria na coleta e criopreservação dos concentrados de plaquetas "secas" obtidos por aferese
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