Atividade do extrato de frutos de Pterodon emarginatus contra o estresse oxidativo e nitrosativo induzido por exercicio agudo em ratos
Fernanda Borges de Araujo Paula
TESE
Português
(Broch.)
T/UNICAMP P281a
Campinas, SP : [s.n.], 2004.
96p. : il.
Orientador: Ione Salgado
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: O exercício intenso pode levar à lesão muscular. Várias evidências apontam uma associação entre a lesão muscular induzida por exercício e geração de espécies reativas de oxigênio (EROs) e de nitrogênio (ERN). Estudos com animais têm demonstrado que o uso de antioxidantes, principalmente os...
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Resumo: O exercício intenso pode levar à lesão muscular. Várias evidências apontam uma associação entre a lesão muscular induzida por exercício e geração de espécies reativas de oxigênio (EROs) e de nitrogênio (ERN). Estudos com animais têm demonstrado que o uso de antioxidantes, principalmente os obtidos de extratos vegetais como terpenos e fenóis, são capazes de remover os radiais livres ou modularem a geração destas espécies oxidantes. A análise prévia do extrato hexânico bruto (EHB) de frutos de Pterodon emarginatus demonstrou a presença do ácido 6?, 7?-dihidroxivouacapâncio (diterpenóide), ?-cariofileno, ?-pineno, mirceno, eugenol e geraniol. O objetivo do presente trabalho foi analisar os possíveis efeitos in vitro e in vivo do extrato hexânico bruto (EHB) de frutos de P. emarginatus sobre o estresse oxidativo e nitrosativo induzido por exercício intenso em cérebro, fígado e músculo tibial anterior de rato. Ratos Wistar machos adultos foram submetidos ao exercício intenso através de contrações padronizadas do músculo tibial anterior induzidas por eletroestimulação funcional (FES) a 50 Hz, durante 15 minutos. Os animais receberam uma (30 minutos antes ou 30 minutos após o exercício) ou três doses (24h, 12h e 30 min antes do exercício) de 498 mg/kg de EHB. A atividade de creatina quinase (CK) foi determinada por método cinético. A peroxidação lipídica foi estimada através da determinação das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A concentração de nitrito foi avaliada através do método de Griess e a nitração de proteínas foi verificada através de ensaios de western blot. Os estudos in vitro demonstraram que o EHB inibiu a oxidação do guaiacol e a peroxidação lipídica em homogeneizados de cérebro e músculo tibial anterior de maneira dose-dependente. A IC50 observada no teste de inibição da oxidação do guaiacol foi de 19,8 ?g/mL e nos testes de inibição da peroxidação lipídica foi de 16,2 ?g/mL para o cérebro e 26,7 ?g/mL para o músculo. A produção de nitrito em homogeneizados destes tecidos foi inibida pelo EHB (IC50 de 49 ?g/mL e 42,3 ?g/mL para o cérebro e músculo, respectivamente) e por L-NAME, AMG e EGTA. O efeito dos inibidores da óxido nítrico sintase (NOS) foi potencializado na presença de EHB. Os ensaios in vivo mostraram que o exercício aumentou a atividade sérica de CK (111U/L no controle e 443U/L 1 h após o exercício), a peroxidação lipídica no cérebro (108,9%), fígado (55,5%) e músculo tibial anterior (967%) e também a concentração de nitrito (90,5%, 30,7%, 60%, respectivamente). A nitração de tirosina induzida por exercício foi observada em todos os tecidos analisados. A administração do EHB foi capaz de prevenir a lipoperoxidação, a produção de nitrito e a nitração de tirosina. Estes efeitos podem ser explicados pela presença dos compostos químicos presentes neste extrato tais como fenóis e terpenos, que têm demonstrado uma capacidade de seqüestrar EROs e neste trabalho foi também demonstrada uma ação inibitória deste extrato sobre a enzima NOS
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Abstract: High-intensity exercise can cause muscle damage. Evidences point to a strong association between physical exercise-induced muscle damage and reactive oxygen (ROS) and nitrogen (RNS) species. Animal studies have shown that phytochemical antioxidants, such as terpens and phenols are capable...
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Abstract: High-intensity exercise can cause muscle damage. Evidences point to a strong association between physical exercise-induced muscle damage and reactive oxygen (ROS) and nitrogen (RNS) species. Animal studies have shown that phytochemical antioxidants, such as terpens and phenols are capable of removing free radicals. Previous chemical analysis of the hexane crude extract (HCE) of Peterodon emarginatus showed the presence of the acid 6?, 7?-dihydroxyvouacapane-17?-oic (diterpenoid), ?-cariophilene, ?-pinene, myrcene, eugenol and geraniol. The aim of the present work was to evaluate the effect of HCE in oxidative and nitrosative stress induced by intense exercise in brain, liver and tibialis anterior muscle of rats. Adult male Wistar rats were submitted to standardized contractions by functional electrical stimulation (FES) of the anterior tibialis muscles (50 Hz, 15 min). Animals were subjected to one doses (30 min before or 30 min after exercise) or three doses (24h, 12h and 30 min before exercise) of 498 mg/kg HCE oral administration. Serum creatine kinase (CK) activities were measured by kinetic method. Lipoperoxidation was estimated by measuring of thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS). NO production was evaluated by measuring nitrite formation, using Griess reagent and tyrosine nitration was assessed by western blot analysis. In vitro studies demonstrated that HCE inhibited guaiacol oxidation (IC50=19,8?g/mL) as well as brain and muscle lipid peroxidation with IC50 of 16,2 ?g/mL and 26,7?g/mL, respectively. The extract affected nitric oxide synthase (NOS) activity in brain (IC50=49?g/mL) and muscle (IC50=42,3?g/mL) homogenates of adult Wistar rats. Nitrite production in brain and muscle tissue homogenates decreased in the presence of NOS inhibitors (NG-nitro-L-arginine methyl ester and aminoguanidine) and was even lower in the presence of HCE. The in vivo studies demonstrated that serum CK activities in the controls (111U/L) increased after 1h FES (443U/L). Intense exercise also increased the lipid peroxidation in the brain (108,9%), liver (55,5%) and tibialis anterior muscle (967%), and also nitrite levels in 90,5%, 30,7%, 60%, respectively. The tyrosine nitration induced by exercise was identified in these tissues. Previous treatment with HCE decreased the lipoperoxidation, nitrite production and also the tyrosine nitration leading to the levels of controls. This effect could be explained by the chemical composition of this extract, that has phenols and terpens, which exhibit free radical scavenging activity and the present results also indicate that EHB has also NOS inhibitory properties
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Salgado, Ione, 1953-
Orientador
Hyslo, Stephen
Avaliador
Moreno, Ronilson Agnaldo, 1960-
Avaliador
Ferreira, Carmen Veríssima, 1969-
Avaliador
Bernades, Celene Fernandes
Avaliador
Atividade do extrato de frutos de Pterodon emarginatus contra o estresse oxidativo e nitrosativo induzido por exercicio agudo em ratos
Fernanda Borges de Araujo Paula
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Fernanda Borges de Araujo Paula
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