Resumo: Ciclosporina A é a principal droga imunossupressora utilizada na prevenção da rejeição de transplantes. Esta droga induz inúmeros efeitos colaterais, incluindo o aumento gengiva I observado em 8 a 70% dos pacientes em tratamento com a droga. Embora a patogênese dos aumentos gengivais seja desconhecida, recentemente foi demonstrado que ciclosporina A induz a expressão do fator de crescimento transformante-betal (TGF-Bl). O objetivo deste trabalho foi investigar o papel de TGF-Bl na patogênese do aumento gengiva I induzido por ciclosporina A, explorando um possivel efeito autócrino deste fator na proliferação celular e na expressão de metaloproteinases de matriz (MMPs) e seus inibidores teciduais (TIMPs). Para determinar o efeito de ciclosporina A na expressão e produção de TGF-Bl, culturas primárias de fibroblastos gengivais humanos normais foram tratadas com concentrações crescentes de ciclorporina A por 24 h, e os níveis de expressão e produção de TGF- (beta) 1 analizados por pelo método sem i-quantitativo da transcriptase reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) e EUSA, respectivamente. Os efeitos de ciclorporina A e TGF - (beta)1 na proliferação de fibroblastos gengivais foram analisados através de 4 ensaios de proliferação celular, incluindo ensaio de crescimento celular, análise da incorporação de bromodeoxiuridina (BrdU), quantificação da expressão imunohistoquímica do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) e potencial mitótico. O efeito de ciclosporina A na expressão de MMP-l, MMP-2, TIMP-l e TIMP-2 foram determinados por RTPCR. Para determinar o efeito autócrino de TGF-Bl na proliferação celular e na expressão de MMPs e TIMPs, nós utilizamos oligonucleotides complementares a região de iniciação da tradução de TGF-Bl. Ciclosporina A, em níveis similares aos encontrados no sangue de pacientes em uso da droga, significantemente estimulou a expressão de produção de TGF-Bl. De uma maneira similar, ciclosporina A estimulou a proliferação celular e inibiu a expresao de MMP-l e MMP-2 por fibroblastos gengivais. Os níveis de TIMP-l e TIMP-2 foram inalterados pelo tratamento com ciclorporina A. O tratamento com ciclosporina A em combinação com o bloqueio na produção de TGF-(beta)1 por oligonucleotideos complementares reduziu os efeitos de ciclosporina A na proliferação celular e na expressão de MMP-l e MMP-2 por fibroblastos gengivais. Nossos resultados demonstram que ciclosporina A induz a expressão TGF-(beta)1 em fibroblastos gengivais, o qual de uma maneira autocrina exacerba a proliferação e reduz a expressão de MMPs em fibroblastos gengivais normais Ver menos

Abstract: Cyclosporin A (CyA) is a widely used immunosuppressant which possesses significant side effects including gingival overgrowth. The pathogenesis of this condition is not ful/y understood. However, recent studies showed that CyA regulates the transcription of several cytokines including transforming growth fador-betal (TGF-(beta)l). The aim of this study was to analyze the potential role of TGF-Bl in the pathogenesis of CyA-induced gingival overgrowth. We hypothesize that TGF-(beta)1 is an important autocrine regulator of cel/ proliferation, synthesis of matrix metal/oproteinases (MMPs) and its tissue inhibitors TIMPS in the experimental settings of CyA induced gingivalovergrowth. To test these hypothesis gingival fibroblasts (GF) from normal gingival were incubated with increasing concentrations of CyA and the expression and production of TGF-Bl determined by RT-PCR and ELISA. Proliferative activity of CyA-treated GF was studied by growth curve (via cel/ counting), BrdU incorporation, quantification of PCNA and mitotic potential. MMPs expression levels were analyzed by RT-PCR. To determine the effects of TGF-Bl on the proliferation rate and on the expression of MMPs by GF under CyA treatment, the cells were incubated with CyA and antisense oligonucleotides (AON) against the TGF-Bl mRNA. CyA simultaneously stimulated TGF-Bl expression, increased proliferation and inhibited expression of MMP-l and MMP-2 with a slight effect on TIMP-l and TIMP-2 expressions. Both CyA and TGF-(beta)1 stimulated significantly the proliferation of GF in a dose-dependent manner. When TGF-Bl was inhibited using specific antisense oligonucleotides (AON) a reduced TGF(beta)1 production was noticed (demonstrated by EUSA) with no signifjcant effect on the mRNA levels. When cells were treated with AON simultaneously with CyA, the effects of CyA on proliferation and expression of MMPs were neutralized, the original proliferation rate and MMPs expression were restored. Our investigation of the molecular events that lead to CyA-induced gingival overgrowth showed that TGF-Bl in an autocrine fashion upregulates proliferation and downregulates expression of MMPs, which may underlie the clinical changes associated with CyA treatment Ver menos