Modulação colinergica da secreção de insulina em presença de leucina em ilhotas de ratos submetidos a restrição proteica
Eliane Filiputti
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP F478m
Campinas, SP : [s.n.], 2003.
Orientador: Everardo Magalhães Carneiro
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: O presente trabalho teve como objetivo estudar alguns dos possíveis determinantes da resposta pancreática deficiente à estimulação com leucina (L) e a associação com agente colinérgico carbacol (CCh), tendo os ratos submetidos à dieta hipoprotéica como modelo experimental. Os sinais de...
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Resumo: O presente trabalho teve como objetivo estudar alguns dos possíveis determinantes da resposta pancreática deficiente à estimulação com leucina (L) e a associação com agente colinérgico carbacol (CCh), tendo os ratos submetidos à dieta hipoprotéica como modelo experimental. Os sinais de desnutrição tais como: baixo peso corporal, hipoalbuminemia, teores elevados de glicogênio e de gordura hepática, estiveram presentes nos animais que receberam dieta hipoprotéica. Esses animais apresentaram ainda menores níveis de insulina plasmática. A análise do aminograma mostrou que aminoácidos importantes com leucina, valina, arginina e taurina estão reduzidos neste modelo experimental, tanto no jejum como no alimentado. Por outro lado, os estudos "in vitro" demonstraram menor oxidação de leucina em ilhotas de rato hipoprotéicos. A monitorização do efluxo de cálcio mostrou aumentado em ilhotas LP em presença de L e CCh. Contudo a resposta secretória de insulina das ilhotas LP foi menor, comparada com a dos animais NP quando estimulada com leucina, potássio na ausência ou na presença de CCh. O mesmo resultado foi observado quando foram utilizados os agentes potencializadores tais como: gliceraldeído, cetoisocaproato, IBMX e PMA em presença de leucina. Com o uso da técnica de Westem Blotting observamos redução na quantidade de proteína p70S6K e AKT e por RT-PCR diminuição da quantidade de mRNA para a p70S6K. Diante disso o período de restrição protéica a que foram submetidos esses animais alterou em ilhotas pancreáticas a oxidação da leucina, o movimento de cálcio, e conseqüentemente a secreção de insulina frente à leucina, potássio, agentes potencializadores e CCh. Por fim, a associação destes resultados com a redução de proteínas como a p70S6K e AKT em ilhotas desses animais pode explicar, pelo menos em parte, a pobre secreção de insulina observada neste modelo experimental
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Abstract: The aim of the present work was to study the effect of low protein diet (LP), m particular the role of reduced intake of the amino acid leucine (L) m the mechanism of pancreatic islet insulin secretion. Male Wistar rats submitted to LP (6% protem) were compared to age and gender matched...
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Abstract: The aim of the present work was to study the effect of low protein diet (LP), m particular the role of reduced intake of the amino acid leucine (L) m the mechanism of pancreatic islet insulin secretion. Male Wistar rats submitted to LP (6% protem) were compared to age and gender matched controls maintamed with normal protein diet (NP) (17% protein). Pancreatic islets isolated from NL and LP groups were submitted to various glucose concentrations and stimulatory drugs to compare the amount of the insulin secretion. The insulin was measured by radioimunoassay. The level of leucine oxidation and 45Ca outflow were also compared by 14(:02 output and 45Ca efflux, respectively. Western Blottillg was applied to compare the levels of p70S6k.l and Akt and RT- PCR to evaluate the levels ofp70S6k.1 mRNA in both groups. LP rats presented with significantly lower body weight, serum protein and albumin, but higher glycogen and liver fat. No differences in serum glucose levels were observed. The aminogram analysis from serum demonstrated that LP groups either fasted or fed had significantly lower levels of leucine, valine, arginine, taurine compared to NP. In vitro insulin secretion in the LP group was significantly lower in the basal situation and in response to stimulation with carbachol, potassium, gliceraldeid, PMS, KIC, IBMX. The addition of the amino acids leucine in the media did not elevated the insulin secretion in the LP group to levels comparable to NP group. In addition, leucine oxidation and calcium out flow from pancreatic islets of LP group were significantly lower. The p70S6k-l and Akt protein expression and p70S6k-1 mRNA levels were lower in LP group as revealed by Westem Blotting and RT-PCR analysis, respectively. These findings indicate that LP diet let to pancreatic islets dysfunction and that correlated with reduced calcium outflow and decreased leucine oxidation in those cells. The mechanisms may involve lower systemic leucine levels, and lower expression of the signaling elements p70S6k.1 and Akt
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Modulação colinergica da secreção de insulina em presença de leucina em ilhotas de ratos submetidos a restrição proteica
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