Prospecção de antibioticos e biocatalisadores : (haloperoxidases e Baeyer-Villiger monoxigenases) em microrganismos
Beatriz Bicalho
TESE
Português
(Broch.)
T/UNICAMP B471p
Campinas, SP : [s.n.], 2003.
155p. : il.
Orientador : Anita Jocelyne Marsaioli
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica
Resumo: o presente trabalho foi organizado em 3 partes. A primeira delas compreende a investigação por compostos antimicrobianos em extratos de metabólitos secundários de 15 fungos filamentosos isolados de abelhas (Trigona sp.). A aplicação dos ensaios de bioautografia e concentração inibitória...
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Resumo: o presente trabalho foi organizado em 3 partes. A primeira delas compreende a investigação por compostos antimicrobianos em extratos de metabólitos secundários de 15 fungos filamentosos isolados de abelhas (Trigona sp.). A aplicação dos ensaios de bioautografia e concentração inibitória mínima (CIM) à monitorização da atividade biológica resultou no isolamento de 4 substâncias conhecidas, sendo 2 quinonas isoméricas (coclioquinona A e isococlioquinona A) de Drechslera dematioidea CCT 5631 e 2 dodecalactonas análogas (curvularina e E-desidrocurvularina) de Curvularia eragrostidis CCT 5634 e de Curvularia pallescens CCT 5654, as quais, em geral, apresentaram valores de CIM altos, relativamente a antibióticos padrão (cloranfenicol, ciclopiroxolamina). A segunda parte do trabalho trata da investigação por haloperoxidases (HPOs) e por Baeyer-Villiger monoxigenases (BVMOs) em diferentes microrganismos. A atividade de HPO não foi detectada nos experimentos realizados, os quais foram realizados com o indeno como substrato. Em contrapartida, utilizando cicloexanonas, BVMOs foram detectadas em Geotrichum candidum CCT 1205, Rhodotorula glutinis CCT 2182 e Rhodotorula minuta CCT 1751, ainda que nas reações com estes últimos os porcentuais de conversão do substrato tenham sido baixos (:::; 10%) relativamente a G. candidum CCT 1205 (60 - 90%). O
monitoramento de reações de biotransformação simultâneas (mais de 1 substrato por microrganismo) foi introduzido com sucesso nesta etapa do trabalho, representando uma primeira ação de otimização do processo de triagem de biocatalisadores em microrganismos. A terceira e última parte do trabalho focaHsou a implementação de triagens para biocatalisadores baseadas em fluorescência. Os experimentos realizados proporcionaram detecçoes inéditas de BVMO em Trichosporon cutaneum CCT 1903 e de epóxido hidrolases em Pichia stipitis CCT 2617, T. cutaneum CCT 1903 e em Agrobacterium tumefaciens CCT 6515 Ver menos
monitoramento de reações de biotransformação simultâneas (mais de 1 substrato por microrganismo) foi introduzido com sucesso nesta etapa do trabalho, representando uma primeira ação de otimização do processo de triagem de biocatalisadores em microrganismos. A terceira e última parte do trabalho focaHsou a implementação de triagens para biocatalisadores baseadas em fluorescência. Os experimentos realizados proporcionaram detecçoes inéditas de BVMO em Trichosporon cutaneum CCT 1903 e de epóxido hidrolases em Pichia stipitis CCT 2617, T. cutaneum CCT 1903 e em Agrobacterium tumefaciens CCT 6515 Ver menos
Abstract: The present research work has been organized in 3 parts. The first of them regards the search for antimicrobial compounds among the secondary metabolites of 15 filamentous fungi isolated from bees (Trigona sp.). Bioactivity-guided compound isolation by bioautography and minimum inhibitory...
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Abstract: The present research work has been organized in 3 parts. The first of them regards the search for antimicrobial compounds among the secondary metabolites of 15 filamentous fungi isolated from bees (Trigona sp.). Bioactivity-guided compound isolation by bioautography and minimum inhibitory concentration (MIC) assays afforded 4 known substances, namely 2 isomeric quinones, cocchlioquinone A and isococchlioquinone A, from Orechslera dematioidea CCT 5631 and 2 analogous dodecalactones, curvularin and E-dehydrocurvularin, from Curvularia eragrostidis CCT 5634 and Curvularia pallescens CCT 5654, which in general presented high MIC values compared to standard compounds (chloranphenicol, cyclopiroxolamine). The second part refers to the search for haloperoxidases (HPOs) and Baeyer-Villiger monooxygenases (BVMOs) in microorganism whole cells. Unfortunately, no HPO activity was detected in the reactions with indene as substrate. On the other hand, in the reactions with cyclohexanones BVMOs were detected in Geotrichum candidum CCT 1205, Rhodotorula glutinis CCT 2182 and Rhodotorula minuta CCT 1751, although the porcentual conversions provided by the latter were reasonably low (:::; 10%) compared to G. candidum CCT 1205 (60 - 90%). Simultaneous monitoring several biotransformation reactions (more than 1 substrate for a microorganism) was successfully introduced in this section as a first step towards screening process optimization. The third and last part of the present work concerns microtiter plate reactions aimed at detecting BVMOs by high throughput screening based on fluorescence. The experiments performed for establishing assay conditions provided the first detection of a BVMO in Trichosporon cutaneum CCT 1903. Additionally, experiments performed in parallel provided the first detection of epoxide hydrolases in Pichia stipitis CCT 2617, T. cutaneum CCT 1903 and in Agrobacterium tumefaciens CCT
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Prospecção de antibioticos e biocatalisadores : (haloperoxidases e Baeyer-Villiger monoxigenases) em microrganismos
Beatriz Bicalho
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