Orientador : Hiroshi Aoyama

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: A pirofosfatase inorgânica foi purificada do gérmen de milho cerca de 174 vezes, com rendimento de 2,6% utilizando-se centrifugações diferenciais, saturação fracionada com sulfato de amônio e cromatografias em DEAE-sephadex. Com a enzima parcialmente purificada foram determinadas as...

Resumo: A pirofosfatase inorgânica foi purificada do gérmen de milho cerca de 174 vezes, com rendimento de 2,6% utilizando-se centrifugações diferenciais, saturação fracionada com sulfato de amônio e cromatografias em DEAE-sephadex. Com a enzima parcialmente purificada foram determinadas as condições ótimas de reação de hidrólise do Ppi: 2 mM Ppi, 5 mM Mg2+, pH=8,3. O valor da Km aparente obtido para o Ppi foi de 59uM. A enzima é bastante específica para o Ppi e Mg2+. Observou-se que outros cátions não servem como cofatores, sendo que Ca2+ é um forte inibidor. Cátions polivalentes como as poliaminas também não substituem o Mg2+ na reação. Com relação aos cátions monovalentes. Observou-se uma inibição de 40% em presença de 100 mM de Li+. A reação catalisada pela pirofosfatase inorgânica de gérmen de milho não foi significativamente afetada por reagentes sulfidrílicos como o NEM e o DTNB. Ppi ou Mg2+, isoladamente, não protege a enzima de inativação térmica à 55 ºC. Dois valores diferentes de energia de ativação, 10165 cal/mol e 16715 cal/mol foram obtidos utilizando-se equação de Arrhenius...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital

Abstract: The inorganic pyrophosphatase was purified from maize germ about 174-fold with a 2.6% recovery, using differential centrifugations, ammonium sulfate precipitation and chromatographies on DEAE-cellulose and DEAE-sephadez. With the enzyme partially purified it was determined the optima...

Abstract: The inorganic pyrophosphatase was purified from maize germ about 174-fold with a 2.6% recovery, using differential centrifugations, ammonium sulfate precipitation and chromatographies on DEAE-cellulose and DEAE-sephadez. With the enzyme partially purified it was determined the optima conditions of the Ppi hydrolysis reaction: 2 mM Ppi, 5 mM Mg2+, pH 8.3. The apparent Km value obtained for Ppi was 59 uM. The enzyme was hiphly specific in relation to Ppi ad to Mg2+. It has been observed that other divalent cations did not serve as cofactors, and Ca2+ was a strong inhibitor. Mg2+ could not be substituted for polivalent cations like polyamines. Among the monovalent cations tested a 40% inhibition was observed in the presence of 100 mM Li+. The reaction catalyzed by maize germ inorganic pyrophosphatase was not significantly affected by sulfydrylic reagents like NEM and DTNB. The enzyme was not protected against thermal inactivation, at 55 ºC, in the presence of Ppi or Mg2+. Two different activation energy values, 10165 cal/mol and 16715 cal/mol were obtained using the Arrhenius plot....Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations