Caracterização farmacologica do relaxamento da musculatura lisa do corpo cavernoso humano isolado induzido por cininas
Adriano Fregonesi
TESE
Português
(Broch.)
T/UNICAMP F881c
Campinas, SP : [s.n.], 2002.
99f. : il.
Orientadores: Nelson Rodrigues Netto Jr., Ronilson Moreno
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Resumo: Objetivo: Caracterizaro subtipo de receptor para cinina envolvido no relaxamento de corpo cavernoso humano induzido por bradicinina (BK), Lys-bradicinina (Lys- BK), Met-Lys-bradicinina (Met-Lys-BK) e des-Arg9-bradicinina (des-Arg9-BK) e investigar se o relaxamento do corpo cavernoso humano...
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Resumo: Objetivo: Caracterizaro subtipo de receptor para cinina envolvido no relaxamento de corpo cavernoso humano induzido por bradicinina (BK), Lys-bradicinina (Lys- BK), Met-Lys-bradicinina (Met-Lys-BK) e des-Arg9-bradicinina (des-Arg9-BK) e investigar se o relaxamento do corpo cavernoso humano induzido por cininas é devido à estimulação de nervos não-adrenérgicos e não colinérgicos que
suprem o tecido cavernoso. Material e Métodos: Tecido cavernoso humano proveniente de doadores cadáveres de múltiplos órgãos para transplante foram retirados e imediatamente colocados em solução de krebs e mantido à 4°C até a utilização (nunca excedendo 24 horas após a remoção). O tecido foi cortado em fragmentos de aproximadamente 2cm, colocados em supensão em sistema de cascata e superfundidos com solução de krebs oxigenada e morna a cinco litros por minuto. Após equilíbrio do fragmento em cascata por aproximadamente 90 minutos, noradrenalina (3~moI/L) foi infundida para indução de contração submáxima dos fragmentos de corpo cavernoso humano (CCH). A liberação de produtos da ciclooxigenase foi prevenida pela infusão de indometacina (6~moVL). Os fragmentos de CCH foram calibrados injetandoem bolus o nitrovasodilatador gliceril trinitrato (GTN) e a sensibilidade dos tecidos foi ajustada eletronicamente. Os agonistas (cininas, histamina e acetilcolina) foram injetados como simples
bolus (acima de 1001-lL)e o relaxamento dos fragmentos de CCH foram expressos como uma percentagem de relaxamento submáximo induzido por GTN. Resultados: Bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina relaxaram de maneira significativa os fragmentos de CCH; em base molar, não houve diferença estatisticamente significativa entre os graus de relaxamento induzido por estes
peptídeos. O agonista de receptor B1 de cininas des-Arg9-bradicinina não teve efeito sobre os fragmentos de CCH. A infusão do antagonista de receptor B2 de cininas HOE 140 (50mmmoI/L) aboliu o relaxamento induzido pela bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina sem afetar aqueles induzidos por acetilcolina e histamina.A infusão do inibidorde óxido nítrico sintase Nw-nitro-L-Argininametil
éster aumentou os tônus dos fragmentos de CCH e reduziu significativamente (p < 0,01) o relaxamento induzido por BK (74%), Lys-BK (90%), Met-Lys-BK (87%) e acetilcolina (89%) sem afetar aqueles induzidos por GTN. A infusão subseqüente de L-arginina (300I-lmoI/L)reverteu parcialmente a hipertonicidade e restaurou significativamente (p < 0,01) o relaxamento induzido por BK, Lys-BK
e Met-Lys-BK. Os resultados foram similares com o inibidor de guanilato ciclase 1H-[1,2,4] oxadiolo [4,3,-alquinoxalin-1-one] que reduziu em mais de 95% (p < 0,01) o relaxamento induzido por BK, Lys-BK, Met-Lys-BK, acetilcolina e GTN. A infusão do bloqueador de canal de sódio tetrodotoxina não teve efeito significativo no relaxamento dos fragmentos de CCH induzidos por BK, GTN e
acetilcolina. Conclusão: Este estudo demonstra claramentea existência funcional de receptores de cininas B2em tecido erétil de corpo cavernoso humano e que, quando ativados, liberam óxido nítrico, Relaxando a musculatura lisa destes tecidos. Como a tetrodotoxina não conseguiu afetar o relaxamento induzido por cininas dos segmentos de corpo cavernoso humano, é provável que estes peptídeos liberem óxido nítrico do endotélio dos sinusóides, e não de neurônios que inervam o tecido cavernoso. Emboraas calicreínas teciduais e seus produtos tenham sido encontrados no sistema reprodutor masculino, a importância
fisiopatológica da sua presença nestes tecidos não está totalmente elucidada Ver menos
suprem o tecido cavernoso. Material e Métodos: Tecido cavernoso humano proveniente de doadores cadáveres de múltiplos órgãos para transplante foram retirados e imediatamente colocados em solução de krebs e mantido à 4°C até a utilização (nunca excedendo 24 horas após a remoção). O tecido foi cortado em fragmentos de aproximadamente 2cm, colocados em supensão em sistema de cascata e superfundidos com solução de krebs oxigenada e morna a cinco litros por minuto. Após equilíbrio do fragmento em cascata por aproximadamente 90 minutos, noradrenalina (3~moI/L) foi infundida para indução de contração submáxima dos fragmentos de corpo cavernoso humano (CCH). A liberação de produtos da ciclooxigenase foi prevenida pela infusão de indometacina (6~moVL). Os fragmentos de CCH foram calibrados injetandoem bolus o nitrovasodilatador gliceril trinitrato (GTN) e a sensibilidade dos tecidos foi ajustada eletronicamente. Os agonistas (cininas, histamina e acetilcolina) foram injetados como simples
bolus (acima de 1001-lL)e o relaxamento dos fragmentos de CCH foram expressos como uma percentagem de relaxamento submáximo induzido por GTN. Resultados: Bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina relaxaram de maneira significativa os fragmentos de CCH; em base molar, não houve diferença estatisticamente significativa entre os graus de relaxamento induzido por estes
peptídeos. O agonista de receptor B1 de cininas des-Arg9-bradicinina não teve efeito sobre os fragmentos de CCH. A infusão do antagonista de receptor B2 de cininas HOE 140 (50mmmoI/L) aboliu o relaxamento induzido pela bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina sem afetar aqueles induzidos por acetilcolina e histamina.A infusão do inibidorde óxido nítrico sintase Nw-nitro-L-Argininametil
éster aumentou os tônus dos fragmentos de CCH e reduziu significativamente (p < 0,01) o relaxamento induzido por BK (74%), Lys-BK (90%), Met-Lys-BK (87%) e acetilcolina (89%) sem afetar aqueles induzidos por GTN. A infusão subseqüente de L-arginina (300I-lmoI/L)reverteu parcialmente a hipertonicidade e restaurou significativamente (p < 0,01) o relaxamento induzido por BK, Lys-BK
e Met-Lys-BK. Os resultados foram similares com o inibidor de guanilato ciclase 1H-[1,2,4] oxadiolo [4,3,-alquinoxalin-1-one] que reduziu em mais de 95% (p < 0,01) o relaxamento induzido por BK, Lys-BK, Met-Lys-BK, acetilcolina e GTN. A infusão do bloqueador de canal de sódio tetrodotoxina não teve efeito significativo no relaxamento dos fragmentos de CCH induzidos por BK, GTN e
acetilcolina. Conclusão: Este estudo demonstra claramentea existência funcional de receptores de cininas B2em tecido erétil de corpo cavernoso humano e que, quando ativados, liberam óxido nítrico, Relaxando a musculatura lisa destes tecidos. Como a tetrodotoxina não conseguiu afetar o relaxamento induzido por cininas dos segmentos de corpo cavernoso humano, é provável que estes peptídeos liberem óxido nítrico do endotélio dos sinusóides, e não de neurônios que inervam o tecido cavernoso. Emboraas calicreínas teciduais e seus produtos tenham sido encontrados no sistema reprodutor masculino, a importância
fisiopatológica da sua presença nestes tecidos não está totalmente elucidada Ver menos
Abstract: Objective: To caracterize the kinin receptor subtype involved in the relaxation of human isolated corpus cavernosum (HCC) induced by bradykinin (BK). Lysbradykinin (Lys-BK), Met-Lys-bradykinin (Met-Lys-BK) and des-Arg9-bradykinin (des-Arg9-BK), and to investigate whether the kinin-induced...
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Abstract: Objective: To caracterize the kinin receptor subtype involved in the relaxation of human isolated corpus cavernosum (HCC) induced by bradykinin (BK). Lysbradykinin (Lys-BK), Met-Lys-bradykinin (Met-Lys-BK) and des-Arg9-bradykinin (des-Arg9-BK), and to investigate whether the kinin-induced relaxation of HCC results from the stimulation of nonadrenergic, noncholinergic (NANC) neurons
supplying the cavernosal tissue. Materiais and Methods: Excised HCC tissues were immediately placed in Krebs solution and kept at 4°C until use (never >24 hours after removal). HCC was cut in strips of - 2 centimetres, supended in a cascade system and superfused with oxygenated and warmed Krebs solution at 5 mUminute. After equilibration for - 90 minutes , noradrenaline (3IJmoI/L)was infused to induce a submaximal contraction of the HCC strips. The release of cyclo-oxygenase products was prevented by infusing indomethacin (6IJmoI/L). HCC strips were calibrated by injecting a single bolus of the nitrovasodilator glyceryl trinitrate (GTN) and the sensitivity of the tissues adjusted electronically to be similar.The agonists (kinins, histamine and acetylcholine)were injected as a single bolus (up to 1001JL)and the relaxation of HCC expressed as a percentage of the submaximal relaxation induced by GTN. Resul1s: Bradykinin, Lys-BK and Met-Lys-BK significantly relaxed the HCC tissues; on a molar basis, there was
no statistical difference among the degrees of relaxation induced by these peptides. The B1kinin receptor agonist des-Arg9-bradykinin had no effect on the HCC. The infusion of the B2 kinin receptor antagonist Hoe 140 (50nmoI/L) virtually abolished the relaxation induced by BK, Lys-BK and Met-Lys-BK without affecting those induced by acetylcholine and histamine. The infusion of the nitric oxide synthase inhibitor NW-nitro-L-argininemethyl ester increased the tone or the HCC tissues and significantly reduced (p < 0.01) the relaxation induced by BK (74%), Lys-BK (90%), Met-Lys-BK (87%) and acetylcholine (89%) without affecting those induced by GTN. The subsequente infusion of L-arginine (300 J,JmoI/L) partially reversed the increased tone and significantly (P < 0.01) restored the relaxationinduced by Bk, Lys-BKand Met-Lys-BK.The resultswere similar with the novel guanylate cyclase inhibitor 1H-[1,2,4] oxadiazolo[4,3,-alquinoxalin-1-one] which reduced by > 95% (p > 0.01) the relaxation induced by BK, Lys-BK, Met-
Lys-BK, acetylcholine and GTN. The infusion of the sodium-channel bolcker tetrodotoxin had no signficant effect on the BK-, GTN- and acetylcholine-induced relaxation of HCC. Conclusion: This study clearly showed the existence of functional B2kinin receptors in human erectile tissues that when activated lead to the release of NO and hence relaxation of the HCC tissues. As tetrodotoxin failed to affect the kinin-induced relaxation of HCC strips, it is likely that these peptides release NO frem the endotheliumof sinuoidal capillaries rather than from neuronal sources supplying the cavernosal tissue. Although tissue kallikreins and their components have been found in the male reproductive system, the physiopathological importance of these findings has yet to be elucidated. Ver menos
supplying the cavernosal tissue. Materiais and Methods: Excised HCC tissues were immediately placed in Krebs solution and kept at 4°C until use (never >24 hours after removal). HCC was cut in strips of - 2 centimetres, supended in a cascade system and superfused with oxygenated and warmed Krebs solution at 5 mUminute. After equilibration for - 90 minutes , noradrenaline (3IJmoI/L)was infused to induce a submaximal contraction of the HCC strips. The release of cyclo-oxygenase products was prevented by infusing indomethacin (6IJmoI/L). HCC strips were calibrated by injecting a single bolus of the nitrovasodilator glyceryl trinitrate (GTN) and the sensitivity of the tissues adjusted electronically to be similar.The agonists (kinins, histamine and acetylcholine)were injected as a single bolus (up to 1001JL)and the relaxation of HCC expressed as a percentage of the submaximal relaxation induced by GTN. Resul1s: Bradykinin, Lys-BK and Met-Lys-BK significantly relaxed the HCC tissues; on a molar basis, there was
no statistical difference among the degrees of relaxation induced by these peptides. The B1kinin receptor agonist des-Arg9-bradykinin had no effect on the HCC. The infusion of the B2 kinin receptor antagonist Hoe 140 (50nmoI/L) virtually abolished the relaxation induced by BK, Lys-BK and Met-Lys-BK without affecting those induced by acetylcholine and histamine. The infusion of the nitric oxide synthase inhibitor NW-nitro-L-argininemethyl ester increased the tone or the HCC tissues and significantly reduced (p < 0.01) the relaxation induced by BK (74%), Lys-BK (90%), Met-Lys-BK (87%) and acetylcholine (89%) without affecting those induced by GTN. The subsequente infusion of L-arginine (300 J,JmoI/L) partially reversed the increased tone and significantly (P < 0.01) restored the relaxationinduced by Bk, Lys-BKand Met-Lys-BK.The resultswere similar with the novel guanylate cyclase inhibitor 1H-[1,2,4] oxadiazolo[4,3,-alquinoxalin-1-one] which reduced by > 95% (p > 0.01) the relaxation induced by BK, Lys-BK, Met-
Lys-BK, acetylcholine and GTN. The infusion of the sodium-channel bolcker tetrodotoxin had no signficant effect on the BK-, GTN- and acetylcholine-induced relaxation of HCC. Conclusion: This study clearly showed the existence of functional B2kinin receptors in human erectile tissues that when activated lead to the release of NO and hence relaxation of the HCC tissues. As tetrodotoxin failed to affect the kinin-induced relaxation of HCC strips, it is likely that these peptides release NO frem the endotheliumof sinuoidal capillaries rather than from neuronal sources supplying the cavernosal tissue. Although tissue kallikreins and their components have been found in the male reproductive system, the physiopathological importance of these findings has yet to be elucidated. Ver menos
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