Resumo: Neste trabalho avaliamos o potencial farmacológico e toxicológico de um novo composto organometálico contendo paládio como metal de transição e estabilizado com ligantes bifosfínico e aminoácido, denominado neste estudo Paladaciclo ferroceno 1 :2. Portanto, para avaliar o potencial antitumoral in vivo, analisamos o crescimento e diferenciação de células precursoras hematopoiéticas para granulócitos e macrófagos (CFU-GM) num modelo experimental de implantação tumoral, com células do tumor ascítico de Erhlich. Nesta análise, verificamos que o Paladaciclo ferroceno 1:2 não foi capaz de reverter a mielossupressoão induzi da pelo T AE e também não preveniu a hematopoiése extramedular (esplênica), que é uma característica marcante do desenvolvimento tumoral. A hematopoiése esplênica não foi observada nos animais que receberam apenas o Paladaciclo ferroceno 1:2, sugerindo. uma baixa toxicidade sistêmica para este composto. Os estudos in vitro, utilizando a técnica de cultura clonal de precursores hematopoiéticos para granulócitos e macrófagos (CFU-GM), demonstraram .uma mielotoxicidade dose-dependente, sendo que a menor concentração testada nesta metodologia (1,18 flM) não alterou o número de CFU-GM em relação ao controle. Essa mesma concentração (1,18 flM), quando adicionada ao meio de cultura líquida de longa duração, para avaliar os efeitos do composto em estudo 1: sobre o estroma medular, demonstrou um efeito hematoprotetor do Paladaciclo ferroceno 1:2 sobre a medula óssea. Nesta cultura observamos um aumento significativo no número de células aderentes do estroma medular quando as células foram incubadas com o Paladaciclo ferroceno 1:2 em relação ao controle sem tratamento. Este aumento no número de células aderentes nas culturas tratadas com o composto foi acompanhado por um maior número de áreas denominadas cobblestone, locais de alojamento de células jovens em culturas de longa duração. A avaliação da citotoxicidade deste composto pelos testes de exclusão do Azul de Trypan e redução do MTT demonstraram um IC de 2,5 flM e 5,3 !-1M, respectivamente. A diferença obtida nas concentrações inibitórias descritas acima poderia ser explicada, pelo menos em parte, através dos diferentes princípios dos métodos, pois o teste de redução do MTT avalia a capacidade da enzima succinato desidrogenase mitocondrial de reduzir o MTT a cristais de formazan enquanto que o teste de exclusão do azul de Trypan avalia a integridade da membrana plasmática pela sua capacidade da excretar o corante tóxico para a célula. Ao avaliarmos a expressão da proteína Bc1-2, que está intimamente ligada ao controle da morte celular programada e/ou à resistência das células malignas aos quimioterápicos, verificamos que a expressão desta proteína não se alterou na presença de diferentes concentrações do Paladacic10 Ferroceno 1:2. Esta ausência de efeitos sobre a expressão deste gene foi" verificada pela metodologia de imunocitoquímica, (método de fosfatase alcalina, anti-fosfatase alcalina- AP AAP) e pela técnica de R T-PC R, sugerindo que o processo apoptótico em células HL60 tratadas com o composto em questão envolve outras vias de indução da apoptose celular. Levando todos os nossos dados em consideração, podemos sugerir que este composto, em baixas concentrações, possui um potencial modulador da resposta hematopoiética e também apresenta uma maior citotoxicidade as células leucêmicas HL60 (células de leucemia mielóide aguda). Estudos in vivo estão em andamento para melhor caracterizarmos o mecanismo de ação desta droga sobre a resposta hematopoiética Ver menos

Abstract: In this work we have investigated the pharmacological and toxicological potential of a new organometallic compound containing palladium as transition metal, wich was called in this study by Palladacycle ferrocene 1:2. Thus, to evaluate the antitumoral activity in vivo, we have analysed the growth and differentiation of granulocyte-macrophage progenitor cells (GM-CFU) in the well established Ehrlich ascites tumor (EAT) experimental model. Our results have demonstrated that the Palladacycle ferrocene 1:2, administered for four consecutive days at a dose of 1 mgkg (se), was not able to revert the myelosuppression induced by the EA T development. Similar results were obtained when we studied the splenic hematopoiesis, since this pathological condition that is induced by the tumor, was not inhibited by the administration of Palladacycle ferrocene 1:2. This .characteristic was not observed in normal mice that received the same treatment schedule suggesting a low sistemic toxicity for this drug. The in vitro studies, using the c10nal culture technique, have demonstrated a dose-dependent reduction in the number of granulocyte-macrophage progenitor cells (GM-CFU) of cultures treated with Palladacycle ferrocene 1:2. However, the smallest concentration (1,18J,tM) analyzed in this assay, showed no toxicity to the bone marrow progenitor cells. This same concentration (1,18 J,tM), when added to the long-term bone marrow culture, significant1y increased the number of adherent stromal cells in relation to the control non-treated cultures. This effect was accompanied by a larger number of cobblestone areas, site of lodging of the young cells in the long-term cultures, in these cultures. The citotoxicity of this compound, analyzed by the Trypan Blue exclusion test and the MTT colorimetric assay, showed an IC of 2,5 J,tM and 5,3 J,tM, respectively. The difference obtained for the ihibitory concentrations described above could be explained, at least in part, by the different methods used. The MTT test evaluates the capacity of the mitochondrial enzyme succinato desidrogenase to reduce the MTT to formazan crystals and the Trypan Blue exclusion test evaluates the cell integrity of the membrane. The Bcl-2 expression, which controls the programmed cell death and/or the resistance of the malignant cells to chemotherapeutic agents, was unaltered in the presence of different Palladacycle ferrocene 1:2 concentrations. This absence of effects on the expression of this gene was verifyied by immunocytochemistry (method of alkaline phosphatase, anti-alkaline phosphatase-AP AAP) and by R T -PCR techniques. These results suggest that other mechanisms are involved in the induction of apoptosis by this compound (which was verified in studies that are in progress in our laboratory using Feulgen reaction). Finally, we suggest that this compound, in low concentrations, modulates the hematopoietic response and it also presents citotoxicity in HL60 cell line. Studies in vivo are in progress in our laboratory to characterize the molecular events involved in the hematopoietic response to this drug Ver menos