Orientador: Maria Luiza Silveira Mello

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: Células HeLa, mantidas por 16 horas a 37°C e submetidas a choque de temperatura de 40 °C e 43°C por 1 hora, foram estudadas comparativamente quanto ao fenótipo celular; propriedades de hasofilia; número e tamanho nuclear e nucJeo­lar; valores de Índice mitótico; micronucleação; e padrão de...

Resumo: Células HeLa, mantidas por 16 horas a 37°C e submetidas a choque de temperatura de 40 °C e 43°C por 1 hora, foram estudadas comparativamente quanto ao fenótipo celular; propriedades de hasofilia; número e tamanho nuclear e nucJeo­lar; valores de Índice mitótico; micronucleação; e padrão de distribuição de massa seca, este último antes e após tratamento com solução salina concentrada. Estas características foram também investigadas em culturas que retomaram às condições controle, por 4 horas após a hipertermia (recuperação). Ao lado de diversidade morfológica observável mesmo nas células em situação controle, foram detectadas projeções citoplasmáticas se desprendendo das células submetidas ao estresse térmico. As características de metacromasia exibidas pelas células indicaram que, sob choque de temperatura, passam a existir ao redor do núcleo componentes não reativos ao método de coloração com azul de toluidina a pH 4.0, certamente de caráter protéico. Os valores de Índice mitótico diminuiram quando comparados com seus respectivos controles. Os números de núcleos por célula e de nucléolos por núcleo não apresentaram diferenças relevantes. Os resultados revelaram um aumento na micronucleação indicando ser a hipertermia drástica (4:>, "C ) UIH agente causador de aberrações cromossômicas e/ou incapacidade di' sobrevivêncin de algurnas células. As diferenças entre os valores de áreas nucleares não foram significa­tivas, mas pôde-se observar sob ação do choque alguns casos de retração do tamanho nuclear, indicativos possivelmente de decréscimo na síntese de RN A ou perda de porções cromossômicas, e na recuperação um aumento da área nuclear representado por proteínas originadas tardiamente. O aumento da área nucleolar registrado na condição de recuperação do choque à temperatura de 43°C sugere um aumento da atividade transcritiva, possibilitando provavelmente o retorno às atividades celulares normais. A análise de imagens de interferência demonstrou mudanças na distribuição de massa seca nuclear sendo mais imediatas e mais freqüentes as alterações quando o choque se processou a 43°C. Estas alterações refletem aumento de massa provavelmente de agregados protéicos, parte dos quais é sensível à remoção com NaCI 2M mesmo após fixação com formol. Os padrões de massa seca normais foram recuperados quando as células submetidas ao choque a 43°C retomaram às condições controle por 4h. Dada a aparente demora em resposta ao choque em a Igumas das células submetidas ao trata­mento a 40 °e , supõe-se que sua recuperação deva ocorrer após as 4 horas de cultivo a 37 °e

Abstract: HeLa cells, held at 37°C for 16 hours and subsequently submitted to heat shock at 40°C and 43°C for 1 hour, were studied comparatively with respect to cellular phenotypes, basophilia properties, nuclear and nucleolar number and sizes, mitotic index values, micronucleation and dry mass...

Abstract: HeLa cells, held at 37°C for 16 hours and subsequently submitted to heat shock at 40°C and 43°C for 1 hour, were studied comparatively with respect to cellular phenotypes, basophilia properties, nuclear and nucleolar number and sizes, mitotic index values, micronucleation and dry mass distribution patterns both before and after treatment with a concentrated saline solution. These characteristics were also investigated in cultures which had been returned to the control conditions for 4 hours after the hyperthermic treatment (recovery). ln addition to the morphological diversification, which could be ob­served even in the control situation, cytoplasmic projections were detected separating from the cells which had been submitted to thermal stress. The characteristics of metachromasy shown by the cells indicated that during thermal shock components which were not stained by toluidine blue at pH 4.0, appeared around the nucleus. These were certainly of a proteic nature. The mitotic index values diminished when compared to their respec­tive controls. The numbers of nuclei per cell and nucleoli per nucleus showed no relevant differences. The results revealed an increase in micronucJeation indicating that drastic hyperthermal treatment (43°C) be an agent causing chromosome aber­rations andj or loss of the survival capacity of some cells. No significant difference between the nuclear areas was detected, al­though some cases of nuclear shrinkage under shock were observed, possibly indicat­ing a decrease in RNA synthesis 01' loss of some chromosome portions, and during recovery an increase in nuclear area due to late produced proteins. The increase in nucleolar area registered during recovery from the thermal shock at 43°C suggested an increase in transcriptional activity probably allowing for the return to normal cellular activities. An analysis of the interference images showed changes in the nuclear dry mass distribution, the alterations being more immediate and more frequent when the shock occurred at 43°C. These alterations reflected an increase in mass probably due to proteic aggregates, part of which were sensitive to removal with 2M N aCI even after fixing with formol. The normal dry mass patterns were recovered when cells submitted to shock at 43°C were returned to their control conditions for 4 hours. Considering the apparent delay in the reaction to the shock in some of the cells submitted to treatment at 40°C, it was supposed that their recovery should occur after the 4 hours of cultivation at 37 C