Estudo comparativo entre testes de controle de qualidade de vacinas anti-rabicas inativadas para uso animal e produção experimental da vacina de referencia nacional
Gonçala Maria Martins Arita
TESE
Português
T/UNICAMP Ar46e
Campinas, SP : [s.n.], 2002.
133 p. : il.
Orientador : Clarice Weis Arns
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: A são avaliadas pelo teste de Habel, considerando o índice 2=104,0 IDL 50 para aprovação oficial das partidas. O objetivo do presente estudo é comparar os testes NIH ("National Institute of Health") e o ELISA indireto com o teste de Habel e produzir experimentalmente a vacina de referência...
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Resumo: A são avaliadas pelo teste de Habel, considerando o índice 2=104,0 IDL 50 para aprovação oficial das partidas. O objetivo do presente estudo é comparar os testes NIH ("National Institute of Health") e o ELISA indireto com o teste de Habel e produzir experimentalmente a vacina de referência nacional (VRN), para uso no NIH. Foram testadas 210 partidas de vacinas, paralelamente pelos testes de Habel e NIH. O teste de Habel aprovou 82,38% de partidas, enquanto o NIH, segundo os limites de 0,9; 0,97; 0,98; 1,0 e 1,1 aprovou, respectivamente, 77,62%; 75,71%; 75,23%; 73,81% e 71,90%. O valor discriminante encontrado para o NIH foi acima de 0,98, sugerindo o uso oficial de 1,0 DI. O teste ELISA indireto foi aplicado a soros de camundongos imunizados com 70 partidas de vacinas, com diferentes índices no Habel. Os pontos de corte, a sensibilidade (S), a especificidade (E), os valores preditivos de resultados positivo (VPRP) e negativo (VPRN) e a razão entre o soro controle positivo e soro de camundongos não vacinados foram determinados, sendo então, recomendado o uso da diluição 1/400, que apresentou ponto de corte de 0,225; 8=97%; E=1O0%; VPRP=1O0% e VPRN=78%, nesse método. A vacina de referência nacional (VRN) foi produzida experimentalmente em células BHK-21, C 13, infectadas com o vírus Pasteur (PV). As suspensões virais (5!! BHK) apresentaram títulos 1O7,66DL 50/rnL em camundongos lactentes e 107,17 DL 50/rnL em camundongos adultos jovens e 3,10 _glrnL de glicoproteína total. O material foi dividido em duas amostras (A e B) e inativado, respectivamente, pela bromo etilienoimina binária (BEI) e pela _-propiolactona (BPL). Para ambos os inativantes houve decréscimo rápido da infectividade e o conteúdo de glicoproteína (cG) total apresentou lenta redução da degradação viral. As amostras A (BEI-12 horas) e B (BPL-6 horas) apresentaram cG insolúvel de 1,92 µg/rnL e 2,02 _glmL, respectivamente e apresentaram resultados satisfatórios nos testes de inativação viral, toxicidade e esterilidade. Para o teste de potência A e B foram sub-divididas em AI e BI (5x concentradas) e A2 e B2 (l10x concentradas), que apresentaram bom desempenho nos testes de controle de qualidade e foram capazes de estimular a resposta imune em camundongos, manifestada pela quantificação de anticorpos IgG e pela proteção ao desafio viral, sugerindo que a metodologia de produção foi adequada à obtenção de uma VRN, compatível com a Vacina de Referência Regional do INPP AZ, podendo ser ampliada para atender à demanda nacional, no NlH.eficiência das vacinas anti-rábicas inativadas comerciais de uso animal, no Brasil, comparative study between quality control tests of antirabies inactiv ated v accines for animal use and experimental production of the national reference v accine for nm
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Abstract: The efficiency of anti-rabies inactivated vaccines that are commercialized for animal use, in Brazil, is evaluated by the Habel test, considering =1 04,o/DL 50 for official approval of the lots. The goals of the present study is to compare the NIH ("National Institute of Health") and the...
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Abstract: The efficiency of anti-rabies inactivated vaccines that are commercialized for animal use, in Brazil, is evaluated by the Habel test, considering =1 04,o/DL 50 for official approval of the lots. The goals of the present study is to compare the NIH ("National Institute of Health") and the indirect ELISA tests to the Habel test and produce the National Reference Vaccine (VRN) experimentally, to be used in the NIH. Two hundred and ten 10ts of vaccine have been tested by the NIH test parallel to the Habel testo The NIH test, following the limits 0,9UI; 0,97UI; 0,98UI; 1,OUI and 1,1 UI approved, respectively, 77,62%; 75,71%; 75,23%; 73,81%; 71,90%, while the Habel test approved 82,38% ofthe 10ts. The cut offvalue determined for the NIH was more than 0,98 DI so 1,0 UI is recomended as the official cut-offvalue. The indirect ELISA was applied in seras of mice immunized with 70 lots of vaccines with varied results in the Habel. The cut off values, the sensibility (8), the specificity (E), the predictable values for positive (VPRP) and negative (VPRN) results and the ratio between positive standard sera and no vaccinated mice sera were determined, so it was decided to adopt in this method the dilution of 1/400 that presents cut-off value of 0,225; 8=97%; E=1O0%; VPRP=100% and VPRN=78%. The National Reference Vaccine (VRN) was produced in BHK cells, C 13, with the Pasteur vírus (PV). The viral suspensions (5!!! BHK) had been titres of 107,66DL 50/rnL in lactents mice and 107,17 DL 50/rnL in young adult mice and 3,10 _g/rnL of total rabies glycoproteins (G). The final volume was divided into samples A and B, tOOt were inactivated, respectively, by binary ethyleneimine (BEI) and by p- propiolactone (BPL). For both inactivants there was a fast decrease ofthe infectivity and a slow decrease ofviral degradation in G contento Sample A (BEI-12 hours) and B (BPL-6 hours) presented insoluble G=1,92 µg/rnL and 2,02 µg/rnL, respectively, as the contents. Both presented satisfactory results in the viral inactivation, in toxicity and in sterility tests. For the potency test, samples A and B were sub-divided into AI and BI (5x concentrated) and into A2 and B2 (l0x concentrated), that presented good response in quality control tests and were capable of inducing immune response in mice, mesured through IgG quantification and protection against the viral challenge, suggesting that the production methodology was adequate to the VRN obtention, compatible to the Regional Reference Vaccine -INPPAZ-, able to be amplified to supply the national request, in the NIH
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Arns, Clarice Weis, 1956-
Orientador
Marangoni, Sergio, 1951-
Avaliador
Consales, Cleide Aschenbrenner
Avaliador
Pinto, Aramis Augusto
Avaliador
Gadelha, Fernanda Ramos, 1964-
Avaliador
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Gonçala Maria Martins Arita
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