Resumo: Persistência Hereditária de Hemoglobina Fetal (PHHF) consiste num grupo heterogêneo de desordens hereditárias, clinicamente benignas, onde ocorrem falhas na mudança perinatal normal de hemoglobina fetal para hemoglobina adulta, resultando em altos níveis de Hb F durante a vida adulta. Suas alterações moleculares correspondem a desordens no grupo de genes p, sendo divididas em duas categorias: as formas delecionais e as substituições de um nuc1eotídeo. Um total de seis delecões relacionadas a PHHF já foram descritas na literatura, sendo associadas a aumentos de ambos os tipos de cadeias y (y A e y_. (õP)O - Talassemias também se originam a partir de deficiências gênicas, em muitos casos bastante similares às que originam as formas delecionais de PHHF, entretanto com menor incremento de Hb F e concomitância de hipocromia e microcitose nas hemácias. Três hipóteses principais foram propostas para explicar a relação destas deleções com a não supressão normal dos genes y na fase adulta: a remoção de regiões competidoras pelo LCR, a justaposição de elementos acentuadores e a remoção de silenciadores do c1uster. Neste trabalho, investigamos a presença de deleções, associadas a PHHF e (õP)O - talassemias, no c1uster da beta-globina em doadores de sangue do Hemocentro e pacientes do Hospital das Clínicas, Unicamp. Para isto, desenvolvemos uma modificação de uma técnica descrita previamente para Distrofia Muscular Duchennel Becker, baseada na possibilidade de se identificar diferenças quantitativas na amplificação de amostras por PCR, em presença de deleções ou duplicações, onde o produto final de amplificação é diretamente proporcional à quantidade inicial de cópias da seqüência alvo. O método, que quantifica por intensidade de fluorescência, identificou em cinco indivíduos, a deleção responsável por PHHF-2, de origem africana. Identificamos também, com primers específicos que flanqueiam os pontos de quebra de deleções, a presença da (õP)O - talassemias do tipo Siciliana em dois indivíduos estudados, que são heterozigotos compostos, tendo associação desta alteração com p - talassemia e Hb S. Este trabalho contn"buiu para o desenvolvimento e aplicação de um método, particularmente mais rápido e de fácil execução, na investigação de deficiências gênicas (ou aumento do número de cópias), e que pode vir a ser utilizado no estudo de alterações, não só no c1uster da p-globina, mas também em outros genes de interesse. Além disto, os dados apresentados neste trabalho sobre a interação entre (õP)O-talassemia Siciliana com p - Talassemia e Hb S representam os primeiros casos descritos no Brasil, com caracterização clínica e molecular. Também destaca-se a presença marcante de uma alteração benigna (PHHF-2) que sabidamente pode influenciar a evolução clínica de determinadas condições, tais como p-talassemia e anemia falciforme Ver menos

Abstract: Hereditary Persistence of Fetal Hemoglobin are arare, heterogeneous and benign group of hereditary disorders with an abnormal switch from feta! to adult hemoglobin, resulting in high levels of Hb F in the adult stage. At a molecular leveI, they are divided in deletion and non-deletion fonns. A total of six deletions related to HPFH have been described, associated with increased levels of both y chains. Most (0(3) - Thalassemias also arise from deletions in the _ globin gene cluster, in some cases these deletions are very similar to those that origina te HPFH. However, these forms demonstra te smaller increases in Hb F and are accompanied by microcytic and hypochromic red blood cells, in the heterozygote state. Three main hypothesis were proposed to explain the relationship between these deletions and the non-suppression of y genes: the removal of competitive regions that interact with the LCR; the juxtaposition of enhancer elements; and the removal of silencers. Here we investigate the presence of gene deletions, associated with HPFH and (o_) - Thalassemia in blood donors at the Hemocenter and patients from the Clinical Hospital, Unicamp. For this, we developed a modification of a technique, described first in Duchenne/ Becker dystrophy, based on the possibility of identifying quantitative differences in the amplifications of samples by PCR, in the presence of deletion or duplication carriers, in which the final product of amplification is direct1y proportional to the initial amount of copies of the sequence targets. The method, employing fluorescence intensity for quantification, identified a deletion responsible for HPFH-2, in five individuais of African origino We also identified, using specific primers that bridge the breakpoints, the presence of Sicilian (0(3) - Thalassemia in two individuais that are compound heterozygous for (_) - Tha1assemia and Hb S, respectively. The sequence analysis revealed the same characteristics described for these alterations. This study contributes to the development and application of an extremely rapid and practical method for the identification of deletions (or increase in gene copy number), which could be used in the study of alterations, not only in the (3 globin gene cluster, but also in other genes of interest. Moreover, the data presented here regarding the alterations in Sicilian (0(3) - Thalassemia in association with ((3) - Thalassemia and HbS represents the first cases described in Brazil, with clinical and molecular characterisation. In addition, there is a strong presence of a benign alteration (HPFH-2), that can ameliorate some conditions, such as ((3) - Thalassemia and Sickle Cell Disease Ver menos