Padronização da tecnica de BN-page e coloração histoquimica dos complexos I e IV da cadeia de transporte de eletrons em diferentes musculos de rato
Agnes Margareth Molnar
DISSERTAÇÃO
Português
(Broch.)
T/UNICAMP M738p
Campinas, SP : [s.n.], 2000.
78f. : il.
Orientadores : Lucia Pereira da Silva, Denise Vaz de Macedo
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: O BN-Page ("Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis") é uma técnica desenvolvida para análise de proteínas de membrana. Associada à coloração histoquímica, essa técnica permite análise e caracterização dos complexos enzimáticos da cadeia de transporte de elétrons. A grande vantagem...
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Resumo: O BN-Page ("Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis") é uma técnica desenvolvida para análise de proteínas de membrana. Associada à coloração histoquímica, essa técnica permite análise e caracterização dos complexos enzimáticos da cadeia de transporte de elétrons. A grande vantagem dessa técnica é a utilização de uma pequena quantidade de tecido (30mg) permitindo análise das atividades das enzimas acima especificadas, sem a necessidade do isolamento de mitocôndrias. Dessa forma, esse método pode ser utilizado no estudo de diversas alterações que podem ser induzidas por condições especiais, dentre as quais: o exercício físico, a DPOC e doenças que afetam a função mitocondrial (Parkinson, Alzheimer etc). O objetivo desse trabalho foi a padronização da técnica de BN-Page associada à coloração histoquímica específica dos complexos I e IV da cadeia de transporte de elétrons em músculo esquelético de rato. Os músculos utilizados foram o sóleo, o gastrocnêmio (porção vermelha e branca) e o semitendinoso. A atividade das enzimas foi medida através de densitometria óptica usando a banda referente ao complexo V isolado por eletroforese e corado com Coomassie Blue como padrão interno. Nossos resultados indicaram uma boa resolução dos géis e uma correlação ótima entre a atividade da enzima citrato sintas e (conhecida como marcador de quantidade de mitocôndria) e a área/intensidade da banda referente ao complexo V, indicando que essa também pode ser utilizada como marcador de conteúdo mitocondrial. A atividade do complexo I e IV dos músculos mais oxidativos (sóleo e gastrocnêmio vermelho) apresentou uma variação bem pequena e uma correlação linear com a área do complexo V. Já nos músculos mais glicolíticos houve maior variação na atividade de ambos complexos e sua correlação com o complexo V foi menor
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Abstract: BN-PAGE (Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis) is a technique developed for the analysis of membrane proteins. This technique added to the histochemical staining enables the analysis and characterization of the activity of the enzymatic complexes of the mitochondrial electron...
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Abstract: BN-PAGE (Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis) is a technique developed for the analysis of membrane proteins. This technique added to the histochemical staining enables the analysis and characterization of the activity of the enzymatic complexes of the mitochondrial electron transport chain. A key advantage of this technique is the small quantity of tissue required (30 mg) for homogenate extraction, allowing the use of this analysis for tissues from different species, inc1uding humano This method can be used for protein defects characterization in mitochondrial myopaties such as Leber's disease, Parkinson and A1zheimer diseases among other pathologies such as COPD (chronic obstructive pulmonary disease) and biochemical adaptations induced by physical exercise. The aim of this work was the standardization of this technique using histochemical staining for Complexes I and N of the eletron-transport chain in four rat skeletal musdes (soleus, red and white gastrocnemius and semitendinosus). The enzyme activity was measured by optical density (Image master lD - Pharmacia Biotech) using the Blue stained complex V area obtained from BN-Page as an internal standard. Its good resolution and the good correlation between its areajintensity and citrate synthase activity indicates that complex V is a good quantitative marker of mithocondrial contento The activity of complex I and N of oxidative musc1es (soleus and red gastrocnemius) presented a narrow range of values and a dose linear correlation wtih complex V. On the other hand, the glycolytic musdes (white gastrocnemius and semitendinosus) presented a wide range in their enzyme activity of both complexes and had a little correlation
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Silva, Lucia Pereira da, 1955-
Orientador
Macedo, Denise Vaz de, 1959-
Coorientador
Campos, Gerson Eduardo Rocha, 1949-
Avaliador
Gadelha, Fernanda Ramos, 1964-
Avaliador
Novello, Jose Camillo, 1955-2022
Avaliador
Padronização da tecnica de BN-page e coloração histoquimica dos complexos I e IV da cadeia de transporte de eletrons em diferentes musculos de rato
Agnes Margareth Molnar
Padronização da tecnica de BN-page e coloração histoquimica dos complexos I e IV da cadeia de transporte de eletrons em diferentes musculos de rato
Agnes Margareth Molnar
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