Resumo: Este trabalho objetivou o isolamento de microrganismos capazes de produzir enzimas que lisam a parede celular de leveduras, a produção, purificação e caracterização de 13-1,3-glucanase lítica. As bactérias líticas foram isoladas de Iodo da usina de açúcar e álcool Santa Helena, Piracicaba, SP. As bactérias líticas isoladas aderiram-se às células viáveis de Saccharomyces cerevisiae 701 e lisaram-nas. A linhagem YLM-B191-1, selecionada para o estudo, foi identificada através das características bioquímicas e fisiológicas como Cellulomonas cellulans. Para a produção da 13-1,3-glucanase lítica, a linhagem de C. cellulans YLM-B191-1 foi cultivada em meio composto de 15 9 de levedura seca; 2,0 9 de (NH4hSO4; 13,6 9 de KH2PO4; 4,2 9 de KOH; 0,2 9 de MgSO47H2O; 0,001 9 de Fe2(SO4h 6H2O; 1 mg de biotina e 1 mg de tiamina por litro. A 13-1,3-glucanase foi purificada do sobrenadante do meio de cultura através de ultrafiltração e cromatografia em coluna de CM-Sepharose CL-6B. A enzima purificada apresentou atividade ótima a 55°C e na faixa de pH entre 4,5 a 6,5. A 13-1,3- glucanase purificada apresentou estabilidade na faixa de pH 5,5 a 6,5 e foi inativada em temperaturas superiores a 55°C. A massa molecular da 13-1,3- glucanase purificada foi estimada em 17,1 kDa através de SDS-PAGE. A 13-1,3- glucanase purificada hidrolisou as ligações 13-1,3-glicosídicas da laminarina atuando como uma endoenzima. Através de microscopia eletrônica de varredura, observou- se que as enzimas líticas da linhagem de C. cellulans YLM-B191-1 foram capazes de alterar a superfície celular de leveduras Ver menos

Abstract: The objective of this research was to isolate microorganisms which produced yeast cell walllytic enzymes and to study the production, purification and characterization of a Iytic ~-1,3-glucanase. The yeast-Iytic bacterium was isolated from the sludge of the Santa Helena sugar and alcohol factory in Piracicaba, SP. The isolated yeast-Iytic bacterium adhered to viable cells of Saccharomyces cerevisiae701 and Iysed them.The yeast-IyticbacteriumYLM-8191-1, selected for this study, was identified as Cellulomonas cellulans, from its biochemical and physiological characteristics.The strain C. cellulansYLM 8191-1 was cultivated in a medium containing (per liter) 2.0 9 of (NH4hSO4; 13.6 9 of KH2PO4;4.2 9 of KOH; 0.2 9 of MgSO47H2O; 0.001 9 of Fe2(SO4h6H2Oand 1 mg each of biotin and thiamin being supplemented with 15 9 of dried yeast as the carbon source for the production of ~-1,3-glucanase. The ~1 ,3-glucanase was purified from the culture fluid of C. cellulans YLM-8191-1 by ultrafiltration and CM-Sepharose CL-68 column chromatography. The purified enzyme showed greatest activity at 55°C and between pH 4.5 - 6.5. The purified ~-1,3-glucanase was stable in the range from pH 5.5 to 6.5 and was inactivated by heating at temperatures above 55°C. The molecular weight of purified ~-1,3-glucanasewas estimated at about 17.1 kDa by SDS-PAGE. The ~-1,3-glucanase hydrolyses the ~-1,3-glucosidic linkages of the laminarin acting as an endoenzyme. Scanning electron microscopy showed that Iytic enzymes from C. cellulans YLM-8191-1 were able to modify the cellular surface of yeast Ver menos