Despirogenação de soro antiofidico : adsorção seletiva em membrana de quitosana
Sindelia Silva de Freitas
DISSERTAÇÃO
Português
(Broch.)
T/UNICAMP F884d
Campinas, SP : [s.n.], 2001.
82p. : il.
Orientador: Sonia Maria Alves Bueno
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica
Resumo: A indústria farmacêutica enfrenta dificuldades com relação a susceptibilidade de seus produtos à contaminação por endotoxinas (ETs). Estas moléculas são lipopolissacarídeos presentes na parede externa de bactérias Gram negativas e devido apresentar alta toxicidade a sua remoção é essencial...
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Resumo: A indústria farmacêutica enfrenta dificuldades com relação a susceptibilidade de seus produtos à contaminação por endotoxinas (ETs). Estas moléculas são lipopolissacarídeos presentes na parede externa de bactérias Gram negativas e devido apresentar alta toxicidade a sua remoção é essencial para administração parenteral segura. Este trabalho visou a remoção de ETs de soro antiofidico, produto farmacêutico que consiste na única forma de tratamento de vítimas de acidentes antiofidicos. A técnica utilizada foi a filtração em membrana reticulada de quito sana por esta demonstrar potencial para a interação com endotoxinas. A membrana de quito sana foi sintetizada em nosso laboratório e apresentou valores de vazão, tensão e área de adsorção (13 rnL.min°1, 0,81 MPa e 15,9 cm2, respectivamente) adequados para a execução dos experimentos. Inicialmente, investigou-se a existência de adsorção de anticorpos do soro na membrana e notou-se que em soluções tamponantes acetato de sódio pH 5,0 e Tris-HCI pH 7,0 (4,25% e 4,67%, respectivamente) obteve-se uma menor adsorção. Em seguida, estudou-se a adsorção de ETs em membranas a partir das soluções tamponantes definidas anteriormente. Neste estudo verificou-se que em tampão Tris-HCI pH 7,0 foram alcançados maiores porcentagens de remoção (97,7% e 99,0% para soluções contaminadas nas concentrações de 150 EU.rnL-1e 1000 EU.rnL-t, respectivamente). Na despirogenação de soluções de soro antiofidico contendo baixa concentração de anticorpos (1 mg.rnL-1) altos valores para a remoção de endotoxinas e recuperação de anticorpos foram observados, chegando a apresentar 1 % de endotoxinas remanescentes e 94,6% de proteína recuperada no produto final inicialmente contaminado com 1000 EU.rnL-1. Os resultados obtidos para a remoção de ETs de soluções de soro contendo alta concentração de anticorpos (cerca de 15 mg.rnL-1), também foram significativos quanto a eficiência de remoção de ETs e recuperação de anticorpos para soluções inicialmente contaminadas com 1000 EU.rnL-1 (98,7% e 82% de ET removida e de proteína recuperada, respectivamente). Além disso, notou-se também que o aumento na concentração de anticorpos resultou em uma maior dificuldade na recuperação destes, sem contudo representar uma dificuldade ao processo de remoção por adsorção
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Abstract: Contamination of therapeutic solutions by endotoxins (ET's) are ofmajor concem in the pharmaceutical industry. The ET's are lipopolyscaccharides found in the outer cell membranes of Gram-negative bacteria and are known to cause strong reactions in man after intravenous application. For...
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Abstract: Contamination of therapeutic solutions by endotoxins (ET's) are ofmajor concem in the pharmaceutical industry. The ET's are lipopolyscaccharides found in the outer cell membranes of Gram-negative bacteria and are known to cause strong reactions in man after intravenous application. For this reason, the removal of ET's ftom therapeutic solutions is a major challenge in downstream processing. In this work, we studied the removal of ET' s ftom snake antivenom serum, the therapeutic employed on the treatment of snake bite accidents. The technique studied for the this removal was the membrane filtration using cross-linked chitosan membranes. We investigated the chitosan membrane synthesis that presented appropriated features of flowrate, resistance to stress and adsorption area (13 rnL.min-l, 0,81 MPa and 15,9 cm2, respectively). The adsorption of proteins (antibodies) and ET's on the membrane was also investigated. The influence of three different buffer systems (Tris-HCI, sodium acetate and phosphate) on the adsorption of antibodies was studied. The best conditions found (lower antibody adsorption) were: pH 5,0 using acetate buffer, and pH 7,0 using Tris-HCI buffer (4,25% and 4,67% of antibody adsorption, respectively). The adsorption of ET's on the membrane when using the selected conditions was studied. Higher ET clearances were obtained using the Tris-HCI pH 7,0 buffer (97,7% and 99,0% for solutions containing initial ET concentrations of 150 and 1000 EU.rnL-
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espectively). The membrane proved to be efficient on the removal of ET' s ftom dilute snake antivenom serum (1,0 mg.mL-1of antibody concentration). ET removal efficiencies as high as 99,0% and antibody recovery of94,6% were obtained, for a solution containing an initial ET concentration of 1000...
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espectively). The membrane proved to be efficient on the removal of ET' s ftom dilute snake antivenom serum (1,0 mg.mL-1of antibody concentration). ET removal efficiencies as high as 99,0% and antibody recovery of94,6% were obtained, for a solution containing an initial ET concentration of 1000 EU/rnL. The depyrogenation efficiency of high antibody concentration serum (approximately 15 mg.rnL-1) was also significant. The ET clearance and antibody recovery of a solution containing an initial ET concentration of 1000 EU.mL-1 were 98,7% and 82,0%, respectively. Moreover, the results indicated that antibody presence in the serum solutions was not a major obstacle for the ET removal processo. However, the antibody recoveries ftom these high concentrated serums were significantly reduced.
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Bueno, Sonia Maria Alves, 1961-
Orientador
Santana, Cesar Costapinto, 1948-
Avaliador
Arruda, Eduardo Jose de
Avaliador
Beppu, Marisa Masumi, 1972-
Avaliador
Despirogenação de soro antiofidico : adsorção seletiva em membrana de quitosana
Sindelia Silva de Freitas
Despirogenação de soro antiofidico : adsorção seletiva em membrana de quitosana
Sindelia Silva de Freitas
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