Purificação, propriedades fisico-quimicas e estudo das atividades inseticida, fungicida e citotoxica de uma lectina presente em sementes de Koelreuteria paniculata
Daniela Carla da Silva Damico
DISSERTAÇÃO
Português
(Broch.)
T/UNICAMP D184p
Campinas, SP : [s.n.], 2002.
105p. : il.
Orientador : Maria Ligia Rodrigues Macedo
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: Neste trabalho, uma lectina presente em sementes de Koelreuteria paniculata (família: Sapindaceae), conhecida como "flor-da-china", foi isolada e purificada a partir de extração em tampão fosfato 0,1 M (pH 7,6), cromatografia de exclusão molecular (Sephadex G-100), cromatografia de afinidade...
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Resumo: Neste trabalho, uma lectina presente em sementes de Koelreuteria paniculata (família: Sapindaceae), conhecida como "flor-da-china", foi isolada e purificada a partir de extração em tampão fosfato 0,1 M (pH 7,6), cromatografia de exclusão molecular (Sephadex G-100), cromatografia de afinidade (Sepharose-tripsina) e coluna de fase reversa C-18 Jl- ondapack (sistema HPLC). A pureza da lectina de K. paniculata (KpLec) foi verificada por eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de SDS, que revelou que esta lectina apresenta duas subunidades de massa molecular aparente de 22 e 44 kDa. Quando submetida ao tratamento com DTT, a lectina se encontra predominantemente em sua forma monomérica de 22 kDa. A massa molecular relativa estimada por gel filtração foi de 22 kDa. a extrato bruto de KpLec hemaglutinou todas as hemáceas humanas do sistema ABa e hemáceas de alguns animais como camundongo, rato, carneiro, boi e coelho. A atividade hemaglutinante de KPLEC mostrou ser estável a diferentes pHs e temperaturas. Dentre os carboidratos testados, a atividade hemaglutinante foi melhor inibida por N-acetil-glicosamina. a tratamento de KpLec com EDT A mostrou que esta lectina requer cátions divalentes para sua atividade hemaglutinante. A determinação da seqüência N-terminal de KpLec mostrou que ela apresenta homologia com outras lectinas de plantas, principalmente com a Urtica dióica aglutinina. A lectina não inibiu o crescimento dos fungos Fusarium oxysporum, Colletotrichum lindemuthianum e Saccharomyces cerevisiae e nem inibiu ou estimulou a agregação plaquetária. Entretanto, KpLec foi capaz de causar efeitos citotóxicos em células Vero (células de rim de macaco verde Africano) e apresentou atividade inseticida contra duas espécies de insetos, Callosobruchus maculatus (Coleoptera:Bruchidae) e Anagasta kuehniella (Lepidóptera:Pyralidae)
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Abstract: A lectin from Koelreuteria paniculata (Sapindaceae) seeds, commonly known as "Goldenrain tree", was isolated and purified by 0,1 M phosphate buffer, pH 7,6, gel filtration chromatography (Sephadex G-100), affinity column (trypsin-sepharose) and reverse phase column C-18 _-Bondapack (HPLC...
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Abstract: A lectin from Koelreuteria paniculata (Sapindaceae) seeds, commonly known as "Goldenrain tree", was isolated and purified by 0,1 M phosphate buffer, pH 7,6, gel filtration chromatography (Sephadex G-100), affinity column (trypsin-sepharose) and reverse phase column C-18 _-Bondapack (HPLC system). K. paniculata lectin's was assayed by polyacrylamide gel electrophoresis yielding two bands of 22 e 44 kDa. In reduced conditions, one main polypeptide chain of 22 kDa was obtained. A molecular weight of 22 kDa was estimated by gel filtration on Superdex G-75 column (FPLC system). The crude extract of KpLec agglutinated all human (ABO) system and animal erythrocytes from mice, rats, sheep, cow and rabbit. The hemagglutination activity of Kplec showed stability to distincts pHs and temperatures. Of the various sugars tested, the lectin was best inhibited by N-acetil glucosamine. The treatment of KpLec with EDT A shows that this lectin need metal ions for its hemagglutination activity. Determination of the lectin N-terminal sequence showed that KpLec present homology with plant lectins, mainly with Urtica dioica agglutinin. The lectin did not inhibit the growth of the fungi Fusarium oxyporum, Colletotrichum inndemuthianum and Saccaromyces cerevisiae. KpLec didn't induce nor inhibited the platelet aggregation. However, KpLec showed citotoxical effects in Vero cells and presented insecticidal activity against two insects pests, Callosobruchus maculatus and Anagasta kuehniella
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Purificação, propriedades fisico-quimicas e estudo das atividades inseticida, fungicida e citotoxica de uma lectina presente em sementes de Koelreuteria paniculata
Daniela Carla da Silva Damico
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Daniela Carla da Silva Damico
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