Detecção do DNA do Trypanosoma cruzi pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em pacientes chagasicos cronicos
Glaucia Elisete Barbosa Marcon
DISSERTAÇÃO
Português
(Broch.)
T/UNICAMP M333d
Campinas, SP : [s.n.], 2001.
107 p. : il.
Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Resumo: A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi é endêmica na América Latina, onde estima-se que 16 a 18 milhões de pessoas estejam cronicamente infectadas. A tripanosomíase americana é caracterizada por uma fase aguda, com elevado número de parasitas no sangue, detectados...
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Resumo: A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi é endêmica na América Latina, onde estima-se que 16 a 18 milhões de pessoas estejam cronicamente infectadas. A tripanosomíase americana é caracterizada por uma fase aguda, com elevado número de parasitas no sangue, detectados através de métodos parasitológicos; e uma fase crônica, onde os parasitas são pouco detectados no sangue periférico, o que toma o diagnóstico dificilneste estágio. Testes sorológicos para o diagnóstico da doença de Chagas são sensíveis, mas sua especificidade é insatisfatória. Por outro lado, a detecção direta do parasita no sangue, como o xenodiagnóstico e a hemocultura, são altamente específicos, mas apresentam baixa sensibilidade. Testes moleculares como a PCR (Reação em Cadeia da Polimerase), que amplifica seqüências repetitivas do cinetoplasto do T cruzi (k DNA) e DNA nuclear têm sido propostos como uma boa alternativa para a detecção de fragmentos do T cruzi no sangue humano. O presente estudo tem como principal objetivo testar o diagnóstico pela PCR em pacientes chagásicos crônicos e pacientes com sorologia duvidosa para a doença de Chagas atendidos no GEDoCh (Grupo de Estudos em Doença de Chagas) / HC / UNICAMP. O DNA extraído do sangue periférico dos pacientes foi amplificado pela PCR utilizando-se oligonucleotídeos do k DNA e DNA nuclear. Fragmentos de 330 pares de base e de 149 pares de base, amplificadospela PCR e PCR dupla a partir dessas regiões, foram detectados em pacientes chagásicos crônicos. Os resultados obtidos foram comparados com a sorologia e xenodiagnóstico, realizados a partir de técnicas já padronizadas. Entre os pacientes com sorologia negativa, não houve amplificação de DN positiva para a doença de Chagas, 43 apresentaram PCR dupla positiva. Dos 28 pacientes com sorologia duvidosa, 11 apresentaram PCR dupla positiva, dos quais um apresenta xenodiagnóstico negativo. Nossos resultados sugerem que a PCR dupla por nós padronizada, pode ser complementar a sorologia para o diagnóstico da doença de Chagas e contribui para o esclarecimento de casos com sorologia duvidosa
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Abstract: Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, is an important endemic illness in Latin America, where an estimated 16 to 18 million persons are chronically infected. The trypanosomiasis involves a characteristic acute phase with high levels of parasites in the bloodstream, allowing a...
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Abstract: Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, is an important endemic illness in Latin America, where an estimated 16 to 18 million persons are chronically infected. The trypanosomiasis involves a characteristic acute phase with high levels of parasites in the bloodstream, allowing a diagnosis by parasitological methods, and a chronic phase in which parasites are not detectable in blood smears, makingthe diagnosis difficult at this stage. Serological tests for T. cruzi detection in blood are sensitive, but their specificity is generally unsatisfactory. On the other hand, direct detection of parasites in blood, either by xenodiagnosis or hemoculture, is highly specific but of low sensitivity. Molecular assays such as the Polymerase Chain Reaction (PCR), which amplify certain repetitive sequences of trypanosome kinetoplast DNA (kDNA), and DNA nuclear have been proposed as good altemative tools for detection of T. cruzi in human blood. The present study aimed to test PCR diagnosis in chagasic chronic patients and doubtful serological patients attended in GEDoCh (Grupo de Estudos em Doença de Chagas)/UNICAMP. The DNA prepared ITompatient's blood was amplified by the PCR using primers of the kinetoplast minicircles and DNA nuclear. A 330 bp and 149 bp Tagmentsoriginating ITomkinetoplast DNA and DNA nuclear was specifically detected in chronic chagasic. The results of these tests were compared with serological diagnosis performed using standard techniques and xenodiagnosis. We found that seven of the serologically negative individuaIs don't give specific amplification product, whereas 43 out of 53 patients previously serodiagnosed as chagasic were positive using the Nested - PCR (DNA nuclear) method. In addition, twelve of twenty-eight patients with doubtful serologic results were confirmed as positive by PCR. That two was negative xenadiagnosis. Our results suggest that the Nested - PCR may be a toei complementary to serology in the diagnosis af Chagas disease, and that it is available for parasite detection in patients with chronic disease and patients with doubtful serologic
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Detecção do DNA do Trypanosoma cruzi pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em pacientes chagasicos cronicos
Glaucia Elisete Barbosa Marcon
Detecção do DNA do Trypanosoma cruzi pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em pacientes chagasicos cronicos
Glaucia Elisete Barbosa Marcon
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