Estudo dos fatores de virulencia de amostras de Escherichia coli isoladas de cães com diarreia e normais : caracteristicas de intiminas produzidas, detectaveis pela reação em cadeia da polimerase (PCR)
Gerson Nakazato
DISSERTAÇÃO
Português
(Broch.)
T/UNICAMP N145e
Campinas, SP : [s.n.], 2001.
82p. : il.
Orientador: Antonio Fernando Pestana de Castro
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: Amostras de Escherichia coZi enteropatogênicas (EPEC) são uma das causas importantes de diarréia aguda em cães,. principalmente nos neonatos. Neste trabalho foram. Estudadas amostras fecais de 137 cães com diarréia e 34 cães normais, de várias faixa etárias e diferentes localidades do Estado...
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Resumo: Amostras de Escherichia coZi enteropatogênicas (EPEC) são uma das causas importantes de diarréia aguda em cães,. principalmente nos neonatos. Neste trabalho foram. Estudadas amostras fecais de 137 cães com diarréia e 34 cães normais, de várias faixa etárias e diferentes localidades do Estado de São Paulo. Através da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), o gene eae foi encontrado em amostras de E. co/i isoladas de 22 cães, sendo 19 de cães com diarréia e 3 normais. Também através do teste de PCR, amostras de E. colí de 2 cães (com diarréia) apresentaram o gene bfpA. Nenhuma destas 22 amostras fecais, apresentou o plasmídio EAF, e genes que codificam enterotoxinas (ST e LT) ou citotoxinas (Stx e CNF). Utilizando iniciadores específicos, entre as 22 amostras fecais eae positivas, 7 amplificaram com iniciadores para intimina ß, 5para y, 1 para a, 1 para 8 e uma amostra para 13 e .., (colônias diferentes). Sete amostras não reagiram com nenhum destes iniciadores (não-tipáveis).Em relação a inserção de LEE ("Locus of Enterocyte Effacemenf') , através de PCR, algumas amostras apresentaram ÚlSerção de LEE em selC (amplificação da junção direita e esquerda do LEE com selC). Em outras LEEpode estar inserido em pheU (pheU inteITompido). E também, foi observado que E. coZi de 7 amostras fecais LEE estaria inserido em uma outra região do cromossomo ainda desconhecida (selC e pheU intacto). Utilizando cultura de células, foi verificado que a maioria das amostras aderiu em células HEp-2 (14 amostras) e HeLa (12 amostras), sendo que a adesão mais predominante foi do tipo localizada..like (LAL) (8 amostras em HEp.2 e 7 em HeLa). Para o teste de "Fluorescence Actin Staining" (F AS), 10 amostras eae positivas (que apresentaram adesão positiva em HEp-2) foram testadas. Em todas as amostras examinadas foram observados acÚIDulo de actina nos pontos de adesão da bactéria às células, portanto sendo consideradas como positivas no teste de FAS. As amos1ras eae positivas apresentaram uma grande variabilidade em relação a sorotipagem. Os soro grupos encontrados foram: 04, 011, 015, 025, 055,088,098,0111,0119,0125,0142,0156,0157,0167,0174 e ONT. Os sorotipos 01l1:H25, 0119:H2, 055:H7 e O142:H6, isolados neste trabalho, também são encontrados em amostras de EPEC de origem humana. Analisando estes dados foi constatada a presença de amostras EPEC em cães com diarréia e normais (conhecidas como "Dog" EPEC - DEPEC). Levando-se em conta que os fatores de virulência encontrados nestas amos1ras são muito semelhante as das EPEC humanas, e verificando-se a sorotipagem de algumas amostras, estes cães poderiam servir como possível fonte de infecção para o homem e vice-versa. A presente pesquisa é original e inédita nas Américas com exceção do Canadá constituindo-se em todos os seus aspectos a primeira constatação no Brasil da ocorrência de amostras DEPEC e suas respectivas características, incluindo a pesquisa dos genes eae, bfpA, plasmídio EAF, sub-tipos de intiminas, inserção do LEE e genes que codificam a pordução de enterotoxinas (8Ta, 8Th, LT-I e LT-II) ou citotoxinas (Stx, CNF)
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Abstract: Strains of Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) are an important cause of acute diarrhea in dogs, mainly in puppies.10 this report 137 feces samples from dogs with diarrhea and.34 normal ones from different ages and regions of the State of São Paulo, were examined By Polymerase Chain...
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Abstract: Strains of Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) are an important cause of acute diarrhea in dogs, mainly in puppies.10 this report 137 feces samples from dogs with diarrhea and.34 normal ones from different ages and regions of the State of São Paulo, were examined By Polymerase Chain Reaction (PCR), the eae gene was found in strains of E. coli from 22 dogs. Nineteen were from dogs with diarrhea and 3 from normal animals. As detected by PCR, strains of E. coli from 2 dogs (with diarrhea) harbored the bfpA gene, and none presented the EAF plasmid. Genes that encode for enterotoxins (S1 and L T) or cytotoxins (Stx and CNF) were not found in any strains, as detected by PCR. Using specific, among 22 eoe positive strains of stools, 7 were also positive for ß intimin, 5 for y, 1 for a?, 1 for a, 1 for ß and y (different colonies) types. Seven of the stra.ins showed no amplified fragments with any of the specific primers for the studied sub-types of intimin. With regard to the sites of insertion of the LEE (Locus of Enterocyte Effacement), as studied by PCR, some strains had the LEE inserted in selC (amplification of right and left junction of LEE with selC). Others strains may have the LEE inserted in pheU (pheU interrupted) and ao equal number of strains had the LEE inserted in a other sire yet unknown (intact selC and pheU). Using cells cultures, it was verified that most strains adhered to HEp-2 cells (14 strains) and to HeLa (12 strains). The most predominant adherence pattern was the localized-like (LAL) (8 strains for HEp-2 and 7 strains for HeLa). In the Fluorescence Actin Staining (F AS) test, 10 eae positive strains and positive for the adherence to HEp-2 were tested. All strains showed accumulation. of actin under the site of adherence of the bacteria to the HEp-2 ce1ls. Thus these strains were considered F AS positive. Positives eae strains showed a wide diversity oí serotypes. Serogroups were found: 04, 011, O15,025, 055, 088_ 098,. 0111, 0119, 0125, 0142, 0156, 0157, 0167, 0174 e ONT. The 0111:H25, 0119:H2, 055:H7 and 0142:H6 serotypes, isolated in this research, are also found among strains of EPEC from humans. These results confirmed the presence of EPEC in dogs with diarrhea and normal dogs (Dog EPEC - DEPEC). As to the virulence factors found in these strains, they were very similar to human EPEC, and an account of these serotypes it is suggested that dogs may play a possible role on the transmission of EPEC infection to humans and vice-versa. These data are original and have not been published yet in North and South America with the exception of Canada. The report of DEPEC strains and their respective characteristics , including search of the eae gene, bfpA, EAF plasmid, intimins sub-types, as well as the insertion of the LEE and the genes that encode for the production of enterotoxins (STa, STb_ LT-I and LT-lI) or cytotoxins (Stx and CNF) are in our opinion the most outstanding ones
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