Resumo: Oncogenes são genes que afetam o crescimento e desenvolvimento celular normal. A maioria dos oncogenes se constitui de formas modificadas de genes normais, denominados de protoncogenes. o protoncogene RAS, encontrado em diversos organismos, codifica uma proteína com atividade de ligação à Guanina trifosfato (GTP) normal, sem atividade de GTPase. O gene RAS mutante é encontrado em muitos seres humanos com cânceres do pulmão, cólon e pâncreas; o produto deste gene mutante é responsável pela divisão incontrolada de células cancerosas. O óxido nítrico é uma importante molécula sinalizadora sintetizada em diversos tecidos humanos, por proteínas codificadas em uma família de genes da NO sintase . A produção de NOS pode ser induzida por diversas substâncias tais como, endotoxinas, citocinas, lipopolissacarídeos bacterianos (LPS) e por 1a-interleucina. O NO ativa a p21ras em células T humanas, como pode ser observado pelo aumento da ligação GTP-p21ras.Recentemente, um grupo de pesquisadores identificou o sítio de interação entre NO e p21ras que é responsável pela iniciação da transmissão do sinal. O presente trabalho teve como objetivo analisar a interação do NO com a proteína p21RAS em células de linhagens leucêmicas mielóide (U937, HL60 e K562) e estudar a expressão do RAS e da iNOS em pacientes com Leucemia Mielóide Aguda.Linhagens leucêmicas foram incubadas com o lipopolissacarídeo (LPS) e interferon y (IFNy) indutores da NO sintase. A expressão da iNOS e do RAS foi analisada através de imunocitoquímica, western blotting e citometria de fluxo. Para se confirmar o aumento da atividade do RAS foi analisada a fosforilação das MAPK p42/44. A dosagem de NO dissolvido no meio foi feita utilizando-se o reagente de Griess. Analisando os resultados obtidos foi possível chegar às seguintes conclusões: 1. Células de leucemia mielóide aguda apresentam superexpressão de iNOS. 2. O aumento da expressão da iNOS, em pacientes com LMA, é independente da p21 RAS. 3. Em linhagens leucêmicas com mutação no N-RAS houve maior - expressão da iNOS em condições basais e redução do NO após estímulo com LPS. 4. As linhagens leucêmicas K562, U937 e HL60 apresentam uma iNOS insensível à estimulação por LPS e IFNy, nos tempos e concentrações apresentadas. 5. A linhagem K562 possui RAS susceptível a aumento da sua expressão por estímulos de LPS e LPS + IFNy nos tempos e concentrações apresentadas Ver menos

Abstract: Oncogenes are genes which affect the normal cellular growth and development. Most oncogenes are derived from normal genes, called protoncogenes. The protoncogene RAS, found in various organisms, codify a guanine triphophate linkage protein, without GTPase activity. The RAS mutant is found in some cancers as lung, breast and colon cancer. Nitric Oxide is an important signaling molecule synthesized, in many different human tissues, by a family of three Nitric Oxide Synthases. The NOS can be induced by addition of Human recombinant Interferon (lFN y), endotoxins, cytocins and bacterial Lipopolissacharide (LPS). Nitric Oxide can activate the RAS in Human T cells, by increasing GTP-p21ras ratio. Recently,the interactionsite was found on CYS 118 on the p21 molecule. The aim of the present study was to analyze the interaction between p21 and nitric oxide in myeloid leukemia cell lines (K562, HL60, and U937 and the expression of RAS and iNOS in human acute myeloid leukemia (AML). The main conclusions reached by this study were that AML cells overexpress iNOS, and this is independent of p21ras.Cultured cells with NRAS mutation express higher iNOS amo~nts, and decrease the NO amount when stimulated with LPS plus IFN. At ali incubation times and ali LPS and IFN concentrations, iNOS was insensible in culture cells. The K562 RAS are 68 liable to increase it's expression by stimulation with LPS and LPS+IFNy treatment at ali times and concentrations shown Ver menos