Picobirnavirus : pesquisa de novos hospedeiros animais, identificação atraves de ensaio de dot-blot e metodos de purificação
Ismar Rocha Haga
DISSERTAÇÃO
Português
(Broch.)
T/UNICAMP H12p
Campinas, SP : [s.n.], 1998.
72f. : il.
Orientador: Maria Silvia Viccari Gatti
Dissertação (Mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: O picobirnavírus (PBV) é um novo vírus, descritos em fezes de humanos, ratos, suínos, cobaias, aves e coelhos. No presente trabalho, é relatada a primeira identificação, através de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGP A), de picobirnavírus em fezes de um animal silvestre mantido em...
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Resumo: O picobirnavírus (PBV) é um novo vírus, descritos em fezes de humanos, ratos, suínos, cobaias, aves e coelhos. No presente trabalho, é relatada a primeira identificação, através de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGP A), de picobirnavírus em fezes de um animal silvestre mantido em cativeiro, o tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla). Este fato sugere a existência de possíveis novos hospedeiros para o PBV na natureza. Também foram implementados e comparados diferentes métodos de concentração e purificação virais a partir de suspensões fecais de diferentes origens, buscando a obtenção de partículas virais purificadas para posteriores estudos de sua estrutura. Quanto aos métodos de concentração, foram usadas a adição de cloreto de cálcio (CaCI2), a adição de polietilenoglicol (PEG) e cloreto de sódio (NaCl) e a ultracentrifugação em colchão de sacarose, método este que apresentou os melhores resultados. Em relação aos processos de purificação, foram testadas soluções de sacarose, tartarato (ácido tartárico, sal dipotássico), cloreto de césio (CsCI) e cloreto de rubídio (RbCI). A utilização do cloreto de rubídio (RbCI) mostrou-se uma alternativa viável à utilização do cloreto de césio (CsCI), amplamente difundido como protocolo de purificação viral, indicando que soluções de RbCI podem ser usadas como protocolos alternativos de purificação do PBV. Foi ainda implementado o primeiro teste imunoenzimático para detecção de picobirnavírus em amostras fecais de diferentes origens, usando membranas de nitrocelulose como fase sólida. Foram observados resultados positivos nas amostras fecais das três espécies (ratos, suínos e tamanduásbandeira), o que pode indicar que os picobirnavírus que infectam estes animais podem possuir antígenos comuns. O teste pode ser utilizado como triagem de amostras em rotina diagnóstica, ao lado da eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) como teste confirmatório. Esta é a primeira descrição de um ensaio imunoenzimático para detecção do PBV em amostras fecais
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Abstract: A novel virus tentatively named picobirnavirus (PBV) has been described in faeces of several species of vertebrates (humans, rats, guinea pigs, pigs, rabbits and chickens). Examination by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) of faecal specimens of giant anteaters (Myrmecophaga...
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Abstract: A novel virus tentatively named picobirnavirus (PBV) has been described in faeces of several species of vertebrates (humans, rats, guinea pigs, pigs, rabbits and chickens). Examination by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) of faecal specimens of giant anteaters (Myrmecophaga tridactyla) kept in captivity revealed the presence of the two equimolar bands resembling those of the picobirnaviruses. This is the first report of picobirnaviruses in faeces of a wild animal in captivity, suggesting that there might be other natural PBV hosts. Different methods for virus concentration were tested: addition of calcium chloride (CaCI2), addition of polyethylene glycol (PEG) and sodium chloride (NaCl) and centrifugation through sucrose cushion, the method that provided the most reliable results. Cesium chloride (CsCI) solutions have been widely used for PBV purification protocols. Alternative protocols for density gradient centrifugation (rubidium chloride, sucrose and potassium tartrate) were tested. The results obtained by using rubidium chloride (RbCI) were compatible with those previously reported for CsCI solutions, indicating that RbCI solutions may be used as an alternative protocol for virus purification, not only for picobirnaviruses but for other viruses as well. An enzyme immunoassay using nitrocellulose membranes is described for the detection of picobirnaviruses in faeces from different origins. In this study, positive results were detected in faecal samples from three different animaIs (rats, pigs and giant anteaters), suggesting that viruses identified in these animaIs might share common antigens. The test characteristics indicate that it can be used as a screening test in routine diagnosis, along with a confirmatory polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) test. This is the first report of such an assay used to detect this new, and yet little known, virus in faecal specimens
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