Resumo: Estudos anteriores envolvendo ducto deferente isolado humano e de Rattus norvegicus (rato) demonstraram a liberação de 6-nitrodopamina (6-ND) e sua ação como modulador endógeno da contratilidade destes tecidos. Visto que esse mediador endógeno se apresenta em humanos e é pouco discutido pela comunidade científica, mais dados necessitam ser gerados para se obter um melhor entendimento de seu real papel no organismo. Portanto, o presente trabalho propõe avaliar se a vesícula seminal isolada de rato (VSR) também apresenta liberação basal de 6-ND, os mecanismos envolvidos nessa liberação e sua ação na capacidade contrátil desse tecido. A liberação basal de 6-ND, dopamina, noradrenalina e adrenalina por células da VSR foi avaliada quantitativamente através de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS). Avaliou-se também o efeito do inibidor de óxido nítrico, L-NAME, do bloqueador de canais de sódio voltagem-dependente, tetrodotoxina (TTX), do inibidor da NADPH oxidase NOX1/4, GKT137831 e do peróxido de hidrogênio na liberação basal de 6-ND detectada por LC-MS/MS. Nos estudos funcionais, avaliou-se a capacidade da 6-nitrodopamina, da dopamina, da noradrenalina e da adrenalina, em diferentes concentrações, de induzir ou potencializar a contração das vesículas seminais, bem como o efeito da TTX, do L-NAME e do epitélio nas contrações da VSR induzidas por estímulo elétrico. A expressão de tirosina hidroxilase (TH) foi investigada por imuno-histoquímica (IHQ) e hibridização "in situ" fluorescente (FISH). A 6-nitrodopamina foi a catecolamina mais liberada, quando comparada a noradrenalina, adrenalina e dopamina. Pré-incubação com L-NAME reduziu apenas a liberação de 6-ND e a pré-incubação com GKT137831 ou peróxido de hidrogênio causou aumento seletivo na liberação de 6-ND. Pré-incubação com tetrodotoxina não afetou a liberação das catecolaminas. Todas as catecolaminas produziram contrações concentração-dependente em VSR, porém a 6-ND apresentou-se menos potente que as outras catecolaminas. Já em baixa concentração, a 6-ND potencializou significativamente as contrações induzidas por noradrenalina, adrenalina e dopamina, fato que não foi observado na presença de tetrodotoxina. Os estudos de IHQ e FISH revelaram a presença de TH nas células epiteliais de VSR. Esta é a primeira demonstração de que a 6-ND é liberada pelo epitélio da VSR e modula a contratilidade deste órgão Ver menos

Abstract: Previous studies involving isolated human and Rattus norvegicus (rat) vas deferens provided the release of 6-nitrodopamine (6-ND) and its action as an endogenous modulator of the contractility of this tissue. Since this endogenous form is present in humans and is little discussed by the scientific community, more data needs to be generated to obtain a better understanding of its role in the organism. Therefore, the present work proposes to evaluate whether the isolated rat seminal vesicle also presents basal release of 6-ND, the mechanisms involved in the release of this catecholamine and its action on the contractile capacity of the tissue. Seminal vesicles underwent assessment of the basal release of 6-ND, dopamine, norepinephrine and adrenaline through an LC-MS/MS process. Basal release was also evaluated in the absence and presence of the nitric oxide inhibitor L-NAME, voltage-gated sodium channel blocker tetrodotoxin (TTX), NADPH oxidase inhibitor NOX1/4 GKT137831 and hydrogen peroxide through the same LC-MS/MS process. In functional studies, the contraction caused by 6-nitrodopamine, dopamine, norepinephrine and adrenaline in this tissue, in the absence and presence of 6-nitrodopamine, dopamine, norepinephrine and adrenaline in different concentrations as contraction potentiating agents, the effect of TTX on contraction, the effect of L-NAME and the epithelium effect on contractions caused by electrical stimulation were evaluated. The expression of tyrosine hydroxylase was investigated by immunohistochemistry and fluorescent in situ hybridization. 6-nitrodopamine was the most released catecholamine, when compared to noradrenaline, adrenaline and dopamine. Pre-incubation with L-NAME only affected the release of 6-ND and pre-incubation with GKT137831 or hydrogen peroxide caused a selective increase in 6-ND release. Pre-incubation with tetrodotoxin did not affect the release of catecholamines. All catecholamines produce concentration-dependent contractions of the rat seminal vesicle, but 6-ND is less potent than other catecholamines. At a low concentration, 6-ND potentiated the contractions caused by norepinephrine, adrenaline and dopamine, a factor that was not present in the presence of tetrodotoxin. Immunohistochemistry and fluorescent in situ hybridization revealed the presence and expression of tyrosine hydroxylase in rat seminal vesicle epithelial cells. This is the first demonstration of the release of 6-nitrodopamine in a rat seminal vesicle and the results indicate that 6-ND released by the epithelium modulates the contractility of the isolated rat seminal vesicle Ver menos