Resumo: O controle do cronotropismo cardíaco envolve um delicado equilíbrio entre os ramos simpático e parassimpático do sistema nervoso autônomo, bem como a integração de vários mecanismos centrais e hormonais. Compreender as nuances deste sistema de controle é crucial para a avaliação e gestão da saúde cardiovascular. A 6-nitrodopamina (6-ND) é uma catecolamina derivada a partir da nitração da dopamina, atualmente sabe-se que ela atua na homeostase de diversas espécies como um mediador endógeno do sistema cardiovascular e sua possível correlação com o controle do cronotropismo cardíaco deve ser estudado. Este trabalho teve como objetivo avaliar a principal óxido nítrico sintase responsável pela produção do 6-ND, sua expressão em átrios e ventrículos de camundongos e correlacionar sua atividade sobre o Cronotropismo cardíaco na presença ou não de seu respectivo inibidor. Foram utilizados animais controles e knockout para as três isoformas de óxido nítrico sintase (eNOS-/-, nNOS -/- e iNOS -/-) A eutanásia foi realizada com overdose de isofluorano 5%, com exposição de até 1 min após parada dos movimentos respiratórios, seguida da exsanguinação e retirada do coração e isolamento do átrio, sendo montados em em ganchos de metal em câmaras de vidro customizadas (10mL) preenchidas com solução de Krebs-Henseleit’s (KHS) gaseificadas continuamente com uma mistura de 95%O2 + 5%CO2 a 37°C usando um circulador térmico. As amostras de tecido permaneceram 30min para estabilização da tensão em 5nM e a tensão isométrica foi registrada através do sistema. Para a análise da liberação basal de 6-nitrodopamina, 2mL do sobrenadante foram coletados e analisados. A frequência atrial foi registrada por trinta minutos após estabilização do átrio submerso em banho de KHS e após adição de solução contendo 100?M de L-NAME e D-NAME. Verificou-se que átrios e ventrículos produzem 6-ND. O níveis de 6-ND em átrios e ventrículos são menores em animais eNOS-/-, não se alteram em animais nNOS-/-, em ventrículos de animais iNOS-/- e são maiores em átrios de animais iNOS-/-. A frequência atrial diminui quando adicionado L-NAME em átrios de animais nNOS-/- e iNOS-/- e não se altera em animais eNOS-/-. A eNOS é a isoforma responsável para a síntese de 6-ND nos átrios e ventrículos isolados de camundongos. A 6-ND é o principal mecanismo pelo qual o NO endógeno modula a frequência cardíaca. O efeito cronotrópico positivo do NO derivado da eNOS, e consequentemente da 6-ND, é apoiado pelo efeito cronotrópico negativo induzido pela L-NAME em átrios isolados de eNOS-/- Ver menos

Abstract: The control of cardiac chronotropism involves a delicate balance between the sympathetic and parasympathetic branches of the autonomic nervous system, as well as the integration of various central and hormonal mechanisms. Understanding the nuances of this control system is crucial for the evaluation and management of cardiovascular health. 6-nitrodopamine (6-ND) is a catecholamine derived from the nitration of dopamine, and it is currently known to act as an endogenous mediator of the cardiovascular system in various species, and its possible correlation with the control of cardiac chronotropism should be studied. This study aimed to evaluate the main nitric oxide synthase responsible for the production of 6-ND, its expression in the atria and ventricles of mice, and to correlate its activity on cardiac chronotropism in the presence or absence of its respective inhibitor. Control and knockout animals were used for the three isoforms of nitric oxide synthase (eNOS-/-, nNOS-/- and iNOS-/-). Euthanasia was performed with 5% isoflurane overdose, with exposure of up to 1 minute after cessation of respiratory movements, followed by exsanguination and removal of the heart and isolation of the atrium, being mounted on metal hooks in custom glass chambers (10mL) continuously gassed with a mixture of 95% O2 + 5% CO2 at 37°C using a thermal circulator. The tissue samples remained for 30 minutes to stabilize the tension at 5nM, and the isometric tension was recorded through the system. For the analysis of basal 6-nitrodopamine release, 2mL of the supernatant were collected and analyzed. The atrial frequency was recorded for thirty minutes after stabilization of the atrium submerged in KHS bath and after addition of a solution containing 100?M L-NAME and D-NAME. It was found that atria and ventricles produce 6-ND. The levels of 6-ND in atria and ventricles are lower in eNOS-/- animals, do not change in nNOS-/- animals, in ventricles of iNOS-/- animals and are higher in atria of iNOS-/- animals. The atrial frequency decreases when L-NAME is added to the atria of nNOS-/- and iNOS-/- animals and does not change in eNOS-/- animals. eNOS is the isoform responsible for the synthesis of 6-ND in isolated mouse atria and ventricles. 6-ND is the main mechanism by which endogenous NO modulates heart rate. The positive chronotropic effect of NO derived from eNOS, and consequently from 6-ND, is supported by the negative chronotropic effect induced by L-NAME in isolated atria of eNOS-/- mice Ver menos