Resumo: O câncer de mama ocupa a segunda posição em incidência e mortalidade entre a população feminina e segundo órgãos nacionais e internacionais esse número tem aumentado nos últimos anos. Embora o câncer de mama triplo negativo, comparado a outros subtipos, seja o menos incidente, ele é o mais agressivo, com menor taxa de sobrevida e, importante, com abordagens terapêuticas ainda bastante limitadas. Assim, o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas é crucial para a melhoria do prognóstico destes pacientes oncológicos. O presente estudo é dividido em duas partes: Na primeira, avaliamos a entrega de material genético para knockout de transforming growth-interacting fator 1 (TGIF1) pelo sistema de edição CRISPR/Cas9, utilizando nanopartículas lipídicas sólidas (SLN), buscando entender a viabilidade de tal sistema para edição gênica. Na segunda parte, buscamos entender o impacto da enzima glutaminase 2 (GLS2) na modulação do microambiente tumoral (tumor microenviroment, TME). A modulação do TME pode induzir mecanismos de evasão imune e apresentação de antígenos deficiente, impactando diretamente no tipo de resposta imunológica e na evolução da doença. Em especial, nos perguntamos se o aumento dos níveis de GLS2 estaria relacionado com a modulação na exposição de moléculas de MHC I na superfície de células tumorais. SLN foram complexadas com sistema de edição gênica CRISPR/Cas9 contendo sgRNA para direcionamento e knockout de TGIF1. Os resultados apontam que células MCF-7 tratadas com SLN com o vetor, além de não mostrarem uma alta taxa de eficiência na transfecção dos plasmídeos, mostraram uma resposta proliferativa mais acentuada, destacando a inviabilidade do sistema para o fim pretendido. Com relação a segunda parte desta tese, mostramos que a modulação da expressão de GLS2 em células murinas de câncer de mama EO771 demonstraram uma correlação proporcional aos níveis de exposição de MHC I, construindo um elo entre o metabolismo energético com a regulação da imunidade tumoral. Esses achados abrem portas para compreender e investigar possíveis alvos terapêuticos para o combate ao câncer de mama Ver menos

Abstract: Breast cancer ranks second in incidence and mortality among the female population, and according to national and international organizations, this number has been increasing in recent years. Although triple-negative breast cancer (TNBC) is the least prevalent subtype compared to others, it is the most aggressive, with lower survival rates and, importantly, highly limited therapeutic approaches. Thus, the development of new therapeutic strategies is crucial to improving the prognosis of these cancer patients. The present study is divided into two parts: In the first part, we evaluated the delivery of genetic material for the knockout of transforming growth-interacting factor 1 (TGIF1) using the CRISPR/Cas9 gene-editing system, encapsulated in solid lipid nanoparticles (SLNs), to assess the feasibility of this system for gene editing. In the second part, we investigated the impact of the enzyme glutaminase 2 (GLS2) on the modulation of the tumor microenvironment (TME). TME modulation can induce immune evasion mechanisms and deficient antigen presentation, directly affecting the type of immune response and disease progression. Specifically, we questioned whether increased levels of GLS2 might be associated with modulation in the exposure of MHC I molecules on the surface of tumor cells. SLNs were complexed with the CRISPR/Cas9 gene-editing system containing a single-guide RNA (sgRNA) for targeting and knocking out TGIF1. The results showed that MCF-7 cells treated with SLNs carrying the vector not only exhibited low transfection efficiency for plasmids but also displayed a more pronounced proliferative response, highlighting the system's inadequacy for the intended purpose. Regarding the second part of this thesis, we demonstrated that modulation of GLS2 expression in murine EO771 breast cancer cells correlated proportionally with the exposure levels of MHC I molecules, establishing a link between energy metabolism and the regulation of tumor immunity. These findings pave the way for understanding and investigating potential therapeutic targets to combat breast cancer Ver menos