Resumo: Há uma necessidade urgente de biomarcadores que possam ajudar no diagnóstico de pacientes com nódulos tireoidianos, especialmente em pacientes classificados como indeterminados pela citologia. Além disso, é essencial distinguir os pacientes que podem ser apenas monitorados daqueles que merecem abordagens mais agressivas. Os microRNAs (miRNA) são pequenos RNAs não codificantes que desempenham um papel fundamental na regulação da expressão gênica e, portanto, na patogênese e progressão de diferentes tipos de câncer. Por serem relativamente fáceis de manipular, a detecção da expressão aberrante de miRNAs em biópsias liquidas tem se mostrado útil para o manejo de diversos tipos de tumores. Para buscar miRNAs potencialmente úteis no manejo de pacientes com nódulos tireoidianos, realizamos, por Sequenciamento de Nova Geração (NGS), a leitura do microcriptoma completo de 18 amostras de soro obtidas a partir da coleta de sangue periférico. O grupo experimental incluiu 14 pacientes com nódulos tireoidianos medindo de 0,4 a 6 cm de diâmetro (11 mulheres, 3 homens; idade média 46,4± 12,3 anos) que foram submetidos a cirurgia investigativa devido à citologia indeterminada. A histologia mostrou que havia 3 bócios, 3 adenomas foliculares (AF), 4 microcarcinomas papilíferos da tireoide (MPT) e 4 carcinomas papilíferos da tireoide (CPT). Estes foram comparados com um grupo de controle composto de 4 indivíduos sem doença da tireoide (4 mulheres, idade média de 38,9± 9,0 anos). Análises de expressão diferencial entre os grupos experimental e controle foram realizadas usando o algoritmo DEseq2. miRNAs com valor de p<0,05 e que apresentavam desregulação maior ou menor que 2 vezes no grupo experimental em comparação com o grupo controle foram considerados significativamente desregulados. Cinqüenta e nove miRNAs desregulados foram identificados no grupo experimental. Foram encontrados 14 miRNAs desregulados em bócio; 31 miRNAs desregulados em AF; 33 miRNAs em MPT; e 20 nas amostras de CPT. miR-224-5p e miR-486-5p foram os miRNAs mais desregulados no grupo de bócio com foldchange 2,8 e -3,2, respectivamente; miR-197-3p foi encontrado em níveis 2,9 vezes maiores e miR-342-5p -3,1 vezes menores no AF. Os miRs mais desregulados comparando MPT e controles foram miR-215-5p (foldchange 3,3) e miR-1255-5p (foldchange -3,0). Além disso, miR-193b-5p foi encontrado 2,5 vezes aumentado no CPT enquanto miR-150-5p foi encontrado em níveis 3,1 vezes menores neste mesmo grupo. Em conclusão, identificamos um perfil miRNA que pode classificar nódulos da tireoide e novos miRNAs que podem ser usados em biópsias líquidas visando o diagnóstico de malignidade em uma simples coleta de sangue Ver menos

Abstract: There is an urgent need for biomarkers that can aid in the diagnosis of the growing population of patients with thyroid nodules, especially on patients classified as indeterminate by cytology. In addition, it is essential to distinguish patients that can be just monitored from those deserving more aggressive approaches. MicroRNAs (miRNA) are small non-coding RNAs that play a fundamental role in the regulation of gene expression and, therefore, in the pathogenesis and progression of different types of cancer. Due to their relatively easy manipulation, the detection of dysregulation of miRNA expression in liquid biopsies has proven useful in the management of various tumors. To search for potentially useful miRNAs in thyroid nodules patients’ management, we submitted to Next Generation Sequencing (NGS), comprising the reading of the complete micro transcriptome, 18 serum samples obtained from peripheral blood collection. The experimental group included 14 patients with thyroid nodules measuring 0.4 to 6 cm in diameter (11 women, 3 men; mean age 46.4± 12.3 years) who underwent investigative surgery due to indeterminate cytology. Histology showed that there were 3 goiters, 3 follicular adenomas (FA), 4 papillary thyroid microcarcinomas (PTM) and 4 papillary thyroid carcinomas (PTC). NGS results were compared to a control group consisting of 4 individuals demonstrably without thyroid disease (4 females, mean age 38.9± 9.0 years old). Differential expression analyses between experimental and control groups were performed using the DEseq2 algorithm. miRNAs with p-value <0.05 and that presented fold-regulation greater or less than 2 in the experimental group compared to the control group were considered significantly dysregulated. Fifty-nine dysregulated miRNAs were identified in the experimental group. Fourteen miRNAs were found dysregulated in goiter; 31 dysregulated miRNAs in FA; 33 miRNAs in PTM; and 20 in the PTC samples. To visualize clusters of significantly dysregulated miRNAs, unique to each analyzed experimental group, we performed the construction of a heat map: miR-224-5p and miR-486-5p were the most up and downregulated miRNAs in the goiter group with 2.8 UA and -3.2 AU, respectively; miR-197-3p (2.9 AU) was the most upregulated and miR-342-5p was -3.1 times downregulated in FA. Exclusively dysregulated miRs also distinguished PTM and PTC groups. The most up and downregulated miRs comparing PTM and controls were miR-215-5p (3.3 AU) and miR-1255-5p (-3.0 AU) respectively. In addition, miR-193b-5p was found 2.5 times upregulated in the PTC whereas miR-150-5p was 3.1 times downregulated in this same group. In conclusion, we demonstrated a miRNA profile that may characterize thyroid nodules and found novel miRNAs which can be used in liquid biopsies aiming the diagnosis of malignancy upon a simple blood collection Ver menos