Resumo: O carcinoma espinocelular (CEC) de cavidade oral é o tipo mais incidente de câncer de cabeça e pescoço no Brasil e no mundo, apresentando diagnóstico tardio e prognóstico ruim. A cisplatina (CDDP) é o quimioterápico de primeira linha utilizado para o tratamento de CEC oral. Porém, fatores intrínsecos e extrínsecos envolvidos na resistência à CDDP continuam a ser desafios para eficácia do tratamento de CEC oral. Nos últimos anos, diversos estudos e modelos de resistência a quimioterápicos apontam a mediação da resistência pela programação transição epitélio-mesênquima (TEM), configurando, assim, um perfil mais invasivo e metástatico do tumor. Neste estudo, propomos um modelo in vitro de resistência gradual a cisplatina utilizando a linhagem celular SCC-9, correlacionando alterações fenotípicas e assinatura transcricional. Assim, através do ensaio de viabilidade celular, determinamos o IC50 de CDDP nas células SCC-9. Então, tratamos essas células com o valor de IC50 e em seguida com o dobro do valor de IC50 obtido inicialmente. Logo, observamos três estados celulares diferentes: SCC-9P (parental) de morfologia epitelial, SCC-9CPR5 (resistência intermediária) perfil misto de células poligonais e mais fusiformes e SCC-9CPR11 (resistência final) com fenótipo predominantemente mesenquimal. Com ensaio de curva de crescimento, observamos que as células resistentes apresentaram proliferação mais lenta quando comparadas às parentais, confirmando a aquisição da resistência à CDDP. Além disso, com ensaio de migração scratch, as células SCC-9CPR5 mostraram perfil mais migratório em grupo correspondente com estágio de resistência parcial. Através de RT-qPCR, avaliamos a expressão de marcadores clássicos associados a TEM como SNAIL1, Vimentina, ZEB1, ZEB2, N-caderina. Com análise de sequenciamento de RNA (RNA-Seq) verificamos assinaturas transcricionais para TEM, resistência à cisplatina correlacionada com genes pouco expressos na ligação de íons cálcio (Ca2+) entre os termos do Gene Ontology (GO) e o enriquecimento de vias, utilizando Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG), relacionadas a ambas as condições, como a via de PI3K-Akt. No geral, destacamos diferentes vias e genes alvos que poderão ser considerados em estudos futuros para investigação de inibição da resistência a cisplatina mediado por TEM em câncer oral num modelo de resistência in vitro Ver menos

Abstract: Oral cavity squamous cell carcinoma (OCSCC) is the most common type of head and neck cancer in Brazil and worldwide showing late diagnosis and a poor prognosis. Cisplatin (CDDP) is commonly used as first-line chemotherapy for the treatment of OSCC. However, intrinsic and extrinsic factors involved in CDDP resistance prevent effectiveness of OSCC treatment. Recently, several studies on chemotherapy resistance models have associated epithelial-mesenchymal transition (EMT) programming-mediated resistance and an invasiveness and metastasis profile of the tumor. In this study, we propose a model of gradual resistance to cisplatin in vitro using the SCC-9 cell line, where we correlate phenotypic changes and a gene transcriptional signature. By cell viability assay, we determined the CDDP IC50 in SCC-9 cells. We then treated the cells using the IC50 value and then with the 2-fold IC50 value. Therefore, we obtained three cellular states, SCC-9P (parental) with epithelial morphology, SCC-9CPR5 (intermediate resistance) with a mixed profile of epithelial and more spindle-shaped cells a hallmark of mesenchymal cells, and SCC-9CPR11 (full resistance) showing predominantly mesenchymal phenotype. Resistant cells showed a suppression of proliferation compared to the parental cells configuring the acquisition of resistance to CDDP, highlighted by the growth curve assay. Furthermore, in the scratch migration assay analyses, SCC-9CPR5 cells showed a more migratory profile corresponding to group cell migration partial EMT (pEMT). Through RT-qPCR, we assessed the expression of markers associated with EMT such as SNAIL1, Vimentin, ZEB1, ZEB2, N-cadherin. RNA sequencing (RNA-Seq) analysis showed transcriptional signatures for EMT among the differentially expressed genes. Cisplatin resistance correlation with genes down-regulated in the binding of calcium ions (Ca2+) among the Gene Ontology (GO) terms, and the enrichment of canonical and non-canonical pathways related to resistance and EMT using Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG), such as the PI3K-Akt signalling pathway. Overall, we highlight several signalling pathways and target genes that could be considered in future studies to investigate EMT-mediated inhibition of cisplatin resistance in oral cancer using an in vitro resistance model Ver menos