Resumo: O diabetes mellitus é um dos grandes problemas modernos de saúde pública no mundo; a busca por novas terapias ou adjuvantes que possam ajudar no seu controle é essencial. Entre os muitos fatores envolvidos na progressão da doença, o estresse de RE é de grande relevância na progressão da disfunção das células beta pancreáticas. O TUDCA é capaz de minimizar este estresse, mas seus mecanismos de ação ainda não são completamente compreendidos. Neste trabalho, estudamos o possível papel da FAK, uma proteína de adesão focal, nesse mecanismo. Realizamos os experimentos em linhagem de célula beta INS-1E que foram divididas em três grupos: submetidas a nenhum tratamento (Controle), ao Palmitato (0.5mM/24h) ou ao Palmitato + TUDCA (100µM/24h). Submetemos estas células adicionalmente ao knockdown da FAK por siRNA específico ou inibidor farmacológico Y15, bem como à incubação com inibidores específicos para os três principais receptores do TUDCA: ?5?1-integrina, TGR5 e S1PR2. O TUDCA se mostrou capaz de minimizar o estresse de RE nessas células, reduzindo o conteúdo proteico de um marcador de estresse de RE, o ATF4, quando comparados ao grupo que foi exposto apenas ao palmitato. Essa capacidade, porém, foi perdida quando células foram submetidas ao knockdown da FAK ou aos inibidores dos três receptores. Além disso, o palmitato levou a um aumento da secreção de insulina, o que foi normalizado pelo tratamento com TUDCA, no entanto em condição de knockdown da FAK essa capacidade de normalizar a secreção foi abolida. Portanto, nossos resultados indicam que a FAK parece ser um elemento importante do mecanismo de ação do TUDCA em mitigar o estresse de RE e promover a normalização da secreção de insulina em células beta pancreáticas, com a FAK possivelmente agindo como um elemento comum pelo qual os três receptores convergem. Essa melhor compreensão acerca dos efeitos do TUDCA pode ajudar a viabilizar novas perspectivas de tratamento contra a disfunção de célula beta pancreáticas Ver menos

Abstract: Diabetes mellitus is one of the great modern public health challenges in the world; the search for new therapies or adjuvants that can help control it is essential. Amidst the many factors involved in the progression of the disease, endoplasmic reticulum stress is of great relevance in the progression of the disfunction of pancreatic beta cells. TUDCA is capable of minimizing that stress, but its mechanisms of action are not still fully understood. In this work, we studied the possible role of FAK, a focal adhesion protein, in this mechanism. We performed our experiments in INS-1E pancreatic beta cell line, divided in three groups: Those subjected to no treatment (Control), exposed to Palmitate (0.5mM/24h) or Palmitate + TUDCA (100µM/24h). We subjected these cells additionally to knockdown of FAK by specific siRNA or Y15 pharmacological inhibitor, as well as incubation with inhibitors for the three TUDCA receptors: ?5?1-integrin, TGR5 and S1PR2. TUDCA was capable of minimizing endoplasmic reticulum stress in these cells, reducing the protein content of a stress marker, ATF4, when compared to the groups exposed solely to Palmitate. This capacity, however, was lost when cells were subjected to knockdown of FAK, or the inhibitors of the three receptors. Besides that, Palmitate led to an increase in insulin secretion, which was normalized by TUDCA treatment; however, in the condition of FAK knockdown, this ability was abolished. Therefore, our results indicate that FAK seems to be an important element of the mechanism of action of TUDCA in mitigating endoplasmic reticulum stress and promoting the normalization of insulin secretion in pancreatic beta cells, with FAK possibly acting as a common element through which signaling of all three receptors converge. This better comprehension of TUDCA effects can help make viable new perspectives of treatment against pancreatic beta cell dysfunction Ver menos