Resumo: A proteinúria é caracterizada pela excreção urinária aumentada de proteína, podendo ser um quadro persistente, mesmo em quantidade bastante reduzida, mas que quando acima do limite considerado normal constitui um importante indicativo de doença glomerular primária ou secundária e de desenvolvimento de doença renal crônica (DRC), além de servir como um importante marcador prognóstico para esta condição. Os podócitos são células altamente especializadas e diferenciadas que recobrem os capilares glomerulares na face externa (urinária) da membrana basal glomerular e são compostos por três segmentos morfológica e funcionalmente diferentes: um corpo celular, processos principais e pedicelos, que são longas projeções citoplasmáticas. Já se sabe que a lesão dos podócitos leva a albuminúria progressiva, no entanto, existem controvérsias em relação ao impacto da proteinúria para o agravamento do apagamento nas podocitopatias. Existem poucos estudos sobre as consequências moleculares resultantes da exposição prolongada ao overload de albumina em podócitos humanos in vitro. O objetivo do presente trabalho foi identificar alterações de expressão dos genes PODXL e TRPC6 após retirada do overload de albumina em cultura celular de podócitos com e sem dano prévio, em condições de exposição a PAN que já apresentaram alteração de expressão prévia, avaliando recuperação de fenótipo. A retirada foi realizada de forma gradual e abrupta, com avaliação de expressão relativa por PCR quantitativo real-time e expressão das proteínas por Western Blot. Os resultados foram analisados com teste ANOVA e Tukey, com p?00,05. Houve recuperação de fenótipo para o gene PODXL exclusivamente na condição de retirada gradual de overload de 20 mg/mL tanto a nível de RNA (p=0,631004) quanto a nível de proteína (p=0,237803), em podócitos previamente expostos a PAN. Nas outras condições ainda permaneceu a diferença de expressão (p<0.01) com superexpressão. Para o gene TRPC6, houve recuperação de fenótipo em todas as condições, a nível de RNA e de proteína (p>0,05). Observou-se ainda, indicativos iniciais de possível associação entre aumento de proliferação celular nas condições de superexpressão de PODXL analisadas, sendo um passo inicial para uma possível relação causal entre a exposição excessiva de albumina nos podócitos, aumento de expressão de podocalixina e malignização de tecidos adjacentes Ver menos

Abstract: Proteinuria is characterized by increased urinary excretion of protein, which can be a persistent condition, even in very low quantities, but when above the limit considered normal, it constitutes an important indication of primary or secondary glomerular disease and the development of chronic kidney disease (CKD). ), in addition to serving as an important prognostic marker for this condition. Podocytes are highly specialized and differentiated cells that cover the glomerular capillaries on the external (urinary) face of the glomerular basement membrane and are composed of three morphologically and functionally different segments: a cell body, main processes and pedicels, which are long cytoplasmic projections. It is already known that podocyte damage leads to progressive albuminuria, however, there is controversy regarding the impact of proteinuria on worsening effacement in podocyte pathologies. There are few studies on the molecular consequences resulting from prolonged exposure to albumin overload in human podocytes in vitro. The objective of the present work was to identify changes in the expression of the PODXL and TRPC6 genes after removal of albumin overload in cell culture of podocytes with and without previous damage, under conditions of exposure to PAN that already showed changes in previous expression, evaluating phenotype recovery . The withdrawal was carried out gradually and abruptly, with evaluation of relative expression by real-time quantitative PCR and protein expression by Western Blot. The results were analyzed with ANOVA and Tukey test, with p?00.05. There was recovery of phenotype for the PODXL gene exclusively in the condition of gradual withdrawal of 20 mg/mL overload, both at the RNA level (p=0.631004) and at the protein level (p=0.237803), in previously exposed podocytes the PAN. In other conditions, the difference in expression (p<0.01) with overexpression still remained. For the TRPC6 gene, there was recovery of the phenotype in all conditions, at the RNA and protein level (p>0.05). It was also observed, initial indications of a possible association between increased cell proliferation in the PODXL overexpression conditions analyzed, being an initial step towards a possible causal relationship between excessive exposure of albumin in podocytes, increased expression of podocalyxin and tissue malignancy adjacent Ver menos