Resumo: O tumor de Wilms, ou nefroblastoma, é o câncer renal mais comum na infância, afetando uma em 10.000 crianças, com idade média entre 2 e 3 anos. Atualmente, devido à atuação de equipes multidisciplinares, 90% dos pacientes diagnosticados com tumor de Wilms são curados, entretanto, cerca de 25% dos pacientes recaem da doença, levando a uma diminuição da sobrevida para cerca de 50%. A histologia dos tumores de Wilms é utilizada como um dos principais fatores prognósticos, como a anaplasia difusa, que está associada a um prognóstico menos favorável. Outros fatores prognósticos incluem idade, estadio do tumor e perda de heterozigosidade nos cromossomos 1p e 16q para tumores tratados com cirurgia pré-quimioterapia. A implementação de biomarcadores moleculares em tumor de Wilms visa melhorar a estratificação de risco dos pacientes, e por isso, diversos candidatos vêm sendo testados por estudos clínicos internacionais. O objetivo deste estudo foi validar o uso de potenciais biomarcadores – alterações de número de cópias de AMER1 (Xq), 1p, 1q, MYCN (2p), WT1 (11p), 16q e TP53 (17p) – para auxiliar na classificação de risco de pacientes com tumores de Wilms no Brasil. Para isso, foram coletadas informações clínicas e patológicas de todos os pacientes diagnosticados no Centro Infantil Boldrini no período de 2005 a 2020, totalizando 186 pacientes. Destes, 40 pacientes com amostras de tumor preservadas em RNAlater armazenadas no biobanco da instituição, foram avaliadas pela técnica de Amplificação Multiplex de Sondas Dependente de Ligação (MLPA, do inglês Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) para quantificar o número de cópias dos biomarcadores candidatos. Para os experimentos que obtiveram um resultado ambíguo ou duvidoso, uma técnica ortogonal – Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real (qPCR, do inglês quantitative real-time PCR) – foi aplicada para confirmação. Dos 40 tumores avaliados, 20 apresentaram alterações cromossômicas. A alteração mais frequente foi o ganho de 1q (9/40-22,5%), seguido de perda de 16q (8/40-20%) e perda de 1p (6/40-15%). Um tumor de Wilms apresentou a perda de 1p e 16q concomitantes, referente a paciente que desenvolveu metástase durante o tratamento e foi a óbito. No grupo de tumores analisados, observou-se que houve um predomínio de alterações moleculares em pacientes com metástase ao diagnóstico, metástase durante o tratamento, progressão, recaída e óbito. Apenas um paciente que foi a óbito não apresentou alterações moleculares, os demais apresentaram alguma alteração genética, sendo o ganho de 1q a alteração mais frequente nesses pacientes. Além disso, a perda de 16q também foi mais frequente em pacientes com desfechos mais problemáticos. Contudo, alguns biomarcadores, como WT1 e MYCN, não apresentaram associação significativa com a recaída e o óbito. Desse modo, as características dos pacientes atendidos no Centro Infantil Boldrini se assemelham com as características de outras coortes internacionais, mostrando que a perda em 1p e 16q e o ganho de 1q são potenciais biomarcadores para o prognóstico de sobrevida inferior em determinados pacientes com TW Ver menos

Abstract: Wilms tumor, or nephroblastoma, is the most common kidney cancer in childhood, affecting one in 10,000 children, with an average age between 2 and 3 years. Currently, due to the work of multidisciplinary teams, 90% of patients diagnosed with Wilms tumor are cured, however, around 25% of patients recover from the disease, leading to a reduction in survival to around 50%. The histology of Wilms tumors is used as one of the main prognostic factors, such as diffuse anaplasia, which is associated with a less favorable prognosis. Other prognostic factors include age, tumor status, and loss of heterozygosity on chromosomes 1p and 16q for tumors treated with prechemotherapy surgery. The implementation of molecular biomarkers in Wilms tumor aims to improve patients' risk stratification, and therefore, several candidates have been tested in international clinical studies. The objective of this study was to validate the use of potential biomarkers – copy number alterations of AMER1 (Xq), 1p, 1q, MYCN (2p), WT1 (11p), 16q and TP53 (17p) – to assist in risk classification of patients with Wilms tumors in Brazil. For this, clinical and pathological information was collected from all patients investigated at the Boldrini Children's Center from 2005 to 2020, totaling 186 patients. Of these, 40 patients with tumor samples preserved in RNAlater stored in the institution's biobank were evaluated using the Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) technique to quantify the number of copies of candidate biomarkers. For experiments that obtained an ambiguous or doubtful result, an orthogonal technique – real-time Polymerase Chain Reaction (qPCR) – was applied for confirmation. Of the 40 tumors evaluated, 20 showed chromosomal changes. The most frequent change was the gain of 1q (9/40-22.5%), followed by loss of 16q (8/40-20%) and loss of 1p (6/40-15%). A Wilms tumor presented the loss of concomitant 1p and 16q, referring to a patient who developed metastasis during treatment and died. In the group of tumors analyzed, it was observed that there was a predominance of molecular changes in patients with metastasis at diagnosis, metastasis during treatment, progression, relapse and death. Only one patient who died did not present molecular alterations, the others presented some genetic alteration, with the gain of 1q being the most frequent alteration in these patients. Furthermore, 16q loss was also more frequent in patients with more problematic outcomes. However, some biomarkers, such as WT1 and MYCN, did not show a significant association with relapse and death. Thus, the characteristics of patients treated at the Boldrini Children's Center are similar to the characteristics of other international cohorts, showing that the loss of 1p and 16q and the gain of 1q are potential biomarkers for the prognosis of inferior survival in certain patients with WT Ver menos