Resumo: O endotélio é um órgão capaz de regular tônus vascular através da liberação de agentes relaxantes (óxido nítrico e prostaciclina) ou contráteis como a endotelina e o EDCF (Endothelium-Derived Contracting Factor). A estimulação de campo elétrico (EFS, Electrical Field Stimulation) induz contrações da aorta da cobra e dos vasos do cordão umbilical humano (HUCV, Human Umbilical Cord Vessels), que são dependentes da presença do endotélio. Este estudo teve como objetivo estabelecer a natureza do(s) mediador(es) responsável(is) pelas contrações induzidas por EFS no HUCV. Anéis com ou sem endotélio da artéria umbilical humana (HUA, Human Umbilical Artery) ou veia (HUV, Human Umbilical Vein) foram montados em câmaras de banho de órgãos contendo solução de KrebsHenseleit oxigenada e aquecida. A liberação basal de dopamina (DA), noradrenalina e adrenalina foi medida por LC-MS-MS (Liquid Chromatography coupled to tandem Mass Spectrometry). As curvas cumulativas de concentração-resposta foram realizadas com dopamina na ausência e na presença de L-NAME ou de antagonistas da dopamina. Os estudos de EFS foram realizados na presença e ausência de L-NAME, tetrodotoxina (TTX), atropina, indometacina, glibenclamida, phentolamina, prazosin e idazoxano, e os antagonistas da dopaminergicos SCH-23390 e haloperidol. A identificação da presensa da enzima tirosina hidroxilase (TH, Tyrosine Hydroxylase) e a dopa-descarboxilase (DopaDesCarboxylase) foram avaliadas por imunohistoquímica a presença do RNA mensageiro da enzima TH foi avaliado por hibridizações fluorescentes in situ (FISH, Fluorescence In Situ Hybridization). A liberação basal de dopamina requer um endotélio intacto tanto no HUA quanto no HUV. TH e DDC estão presentes apenas no endotélio de HUA e HUV, conforme determinado por imuno-histoquímica. A dopamina induziu contrações em HUA apenas na presença de L-NAME. As contrações induzidas por dopamina em HUV foram fortemente potencializadas por L-NAME. As contrações induzidas por EFS em ambos HUA e HUV foram potencializadas por L-NAME e inibidas pelo antagonista do receptor D2-like haloperidol. TTX, prazosin e idazoxan, atropina, indometacina, inibidor dos canais K-ATP glibenclamida e o antagonista do receptor tipo D1-like SCH-23390 não tiveram efeito nas contrações induzidas por EFS de HUA e HUV. Nossos resultados demonstram que dopamina é liberada pelo endotélio e modula a reatividade vascular no cordão umbilical humano Ver menos

Abstract: The endothelium is an organ capable of regulating vascular tone through the release of relaxing agents (nitric oxide and prostacyclin) or contractile agents such as endothelin and endothelium-derived contracting factor. Electric field stimulation (EFS) induces contractions of snake aorta and human umbilical cord vessels (HUCV), which are dependent on the presence of endothelium. This study aimed to establish the nature of the mediator(s) responsible for EFS-induced contractions in the HUCV. Human umbilical artery (HUA) and vein (HUV) rings with or without human endothelium were mounted in organ bath chambers containing heated (37C°), oxygenated (95%O2/5%CO2) Krebs-Henseleit’s solution. Basal release of dopamine (DA), noradrenaline and adrenaline were measured by liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS-MS). Cumulative concentrationresponse curves were performed with dopamine in the absence and presence of L-NAME and dopamine receptor antagonists. EFS studies were performed in the presence and absence of L-NAME, tetrodotoxin (TTX), atropine, indomethacin, glybenclamide, phentolamine, prazosin and idazoxan, and the dopaminergic antagonists SCH-23390 and haloperidol. The identification of the presence of the enzyme tyrosine hydroxylase (TH) and dopa-decarboxylase (DDC) was evaluated by immunohistochemistry and the presence of TH enzyme messenger RNA (mRNA) was evaluated by FISH (Fluorescence in Situ Hybridization). Basal dopamine release requires an intact endothelium in both the HUA and the HUV. TH and DDC are present only on the endothelium of HUA and HUV, as determined by immunohistochemistry, and TH mRNA identified by FISH in the endothelium of both HUA and HUV. Dopamine induced contractions in HUA only in the presence of L-NAME. Dopamine-induced contractions in HUV were strongly potentiated by L-NAME. EFS-induced contractions in both HUA and HUV were potentiated by L-NAME and inhibited by the D2likereceptor antagonist haloperidol. TTX, prazosin and idazoxan, atropine, indomethacin, glybenclamide and the D1-like receptor antagonist SCH-23390 had no effect on contractions. induced by EFS of HUA and HUV. Our results demonstrate that dopamine is released by the endothelium and modulates vascular reactivity in the human umbilical cord and that dopamine is the major EDCF Ver menos