Resumo: Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), as leucoplasias orais (LO) são definidas clinicamente como placas brancas não removíveis à raspagem e que não podem ser definidas como qualquer outra doença. Já a leucoplasia verrucosa proliferativa (LVP), um subtipo de LO, apresenta um perfil epidemiológico diferente, não ligado a hábitos de fumo ou etilismo e apresenta altos índices de recorrência. A progressão de LO e LVP para carcinoma espinocelular (CEC) é de aproximadamente 2% e maior que 70%, respectivamente. A grande preocupação da progressão é que o CEC apresenta taxa de sobrevida de casos avançados de aproximadamente 50% em 5 anos após o diagnóstico, e corresponde a 90% dos tumores malignos de cavidade oral. Além disso, de acordo com o GLOBOCAN 2018, o CEC está entre os 10 tumores com maior incidência no mundo. Dessa forma, torna-se fundamental conhecer os marcadores que possam ajudar predizer a transformação maligna na prática clínica. Para isso, nesse estudo avaliou a abundância das proteínas na saliva por proteômica baseada em descoberta, cujo fluido é promissor como fonte de marcadores por não ser invasivo e estar em contato direto com as lesões. Foi realizada a coleta de saliva dos pacientes, divididos em quatro condições de acordo com o tipo de lesão, LO (N=16), LVP (N=13) e CEC (N=14) e, grupo controle (CO, N=15). Em resumo, as proteínas de cada amostra foram submetidas aos passos de i) quantificação, ii) precipitação, iii) redução, alquilação e digestão com tripsina e LysC, iv) marcação dos peptídeos com etiquetas contendo 10 diferentes reagentes isóbaros que permitem a quantificação relativa por meio de íons repórteres únicos e v) injeção e aquisição dos dados no equipamento Q Exactive HF-X acoplado ao sistema de cromatografia líquida. Os arquivos brutos foram submetidos às buscas no programa Proteome Discoverer 2.2 e analisados no programa Scaffold 4.8.7. As análises estatísticas foram realizadas no Perseus 1.6, o enriquecimento dos processos biológicos no Enrichr e a correlação com dados clínicos públicos no PROGgeneV2. Os resultados indicam a identificação e quantificação de 319 proteínas na saliva. Trinta e sete proteínas são estatisticamente significantes entre todas as condições, sendo 13 proteínas diferencialmente abundantes entre CO e CEC e 18 entre LO e CEC, três proteínas foram exclusivas do grupo CO e quatro exclusivas entre LVP e CEC. Das 37 proteínas, doze proteínas tiveram associação entre a expressão gênica em carcinoma de cabeça e pescoço com o baixo prognóstico em sobrevida geral, sobrevida livre de metástase e sobrevida livre de recorrência. Em conclusão, esse estudo indica que proteínas da saliva apresentam potencial de predizer a transformação maligna. Destaca-se as proteínas alfa-2-macroglobulina, moesina e receptor polimérico de imunoglobulina (CO e CEC) como candidatas a marcadoras de malignização, pois são diferencialmente abundantes entre CO e CEC e nos grupos LO e LVP apresentam uma abundância intermediária. O próximo passo desse projeto é a verificação dos candidatos em saliva por proteômica dirigida e em imunohistoquímica das lesões em um coorte independente de pacientes Ver menos

Abstract: According to the World Health Organization (WHO), Oral Leukoplakias (OL) are clinically defined as irremovable onto scraping white plaques, which cannot be defined as any other lesion. Proliferative Verrucous Leukoplakia (PVL) is a subtype of OL which has a different epidemiological profile, not related to smoking or drinking habits and presents high rates of recurrence. The progression of OL and PVL into Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) are about 2% and higher than 70%, respectively. The major concern from this progression is that the OSCC survival rate is still about 50% in 5 years after the diagnosis for advanced cases, and corresponds to 90% of malignant tumors of oral cavity. According to GLOBOCAN 2018, it is amongst the 10 most incident tumors in the world. Thus, the knowledge of potential markers that can anticipate the malignant transformation in the clinical routine is needed. For that, this study analyzed the abundance of proteins in saliva through discovery-based proteomics, this fluid is a promising source of markers for not being invasive and having direct contact with the lesions. The saliva was collected from the patients divided in four conditions according to each lesion, OL (N=16), PVL (N=13), OSCC (N=14) and control group (CO), (N=15). Briefly, the proteins of each group were submitted to: i) quantification, ii) precipitation, iii) reduction, alkylation and digestion with trypsin and LysC, iv) peptide tagging with 10 different isobaric tags that allows relative quantification through unique reporter ions and v) injection and data acquisition on a Q Exactive HF-X coupled to liquid chromatography system. Raw files were submitted to Proteome Discoverer 2.2 and Scaffold 4.8.7. This statistical analysis was performed in Perseus 1.6, the enrichment of biological processes in Enrichr and the correlation with public clinical data in PROGgeneV2. Results show the identification and quantification of 319 proteins in saliva. Thirdy-seven proteins are statistically significant amongst all conditions and 3 are exclusive of CO group and 4 are exclusive between PVL and OSCC, 13 proteins were differentially abundant between CO and OSCC and 18 between OL and OSCC. From 37 proteins, twelve showed association between the gene expression in HNSCC and poor prognosis in overall survival rate, metastasis free survival rate and relapse free survival rate. In conclusion, this study indicates that saliva proteins have potential to predict malignant transformation. We highlight the proteins alfa-2-macroglobulin, moesin and polymeric imunoglobulin receptor as candidate markers in malignant transformation, considering they are diferentially abundant in CO and OSCC and have an intermediary abundancy in OL and PVL. The next step of this project will be to verify these candidates in saliva through targeted proteomics and immunohistochemistry of lesions in an independent patient cohort Ver menos