Estudo do promotor do gene da cadeia alfa 2 do colageno tipo I em portadores de fibromatoge gengival hereditaria
Raquel Fernanda Gerlach
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP G316e
Piracicaba, SP : [s.n.], 1998.
40f. : il.
Orientador: Sergio Roberto Peres Line
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Resumo: Há grande variação interindividual de fibroblastos gengivais em relação à síntese de proteínas da matriz. Esta variabilidade está bem documentada em casos de reação fibrótica gengival induzida por drogas, mas o mesmo não acontece em relação à Fibromatose Gengival Hereditária (FGH), condição...
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Resumo: Há grande variação interindividual de fibroblastos gengivais em relação à síntese de proteínas da matriz. Esta variabilidade está bem documentada em casos de reação fibrótica gengival induzida por drogas, mas o mesmo não acontece em relação à Fibromatose Gengival Hereditária (FGH), condição em que há aument9 da secreção de colágeno normal na matriz extracelular. Condições particulares individuais como polimorfismos genéticos ou mutações podem influir na resposta de fibroblastos a estímulos do ambiente. Assim, procuramos identificar polimorfismos na região do promotor da cadeia alfa 2 do colágeno tipo 1 (COLIA2) em um grupo de pacientes normais (n=12) e outro de portadores de FGH (n=13). Além disso, também testamos a hipótese de alteração no padrão de metilação destaseqüência estar relacionada ao aumento da expressão do colágeno do tipo I em portadores de FGR. Primeiramente foi feita a amplificação por PCR da região do promotor da cadeia alfa 2 do colágeno entre -340 e +2 pares de base(bp), porção do promotor que possui mais seqüências reconhecidas como determinantes na interação com fatores de transcrição. A ste passo se seguiu a análise de heteroduplexes para a identificação de polimorfismos. Esta análise foi feita do seguinte modo: aquecimento das amostras a 98°C por 5 minutos, resfi-iamento a O°C e manutenção a 20°C por uma hora. A detecção de heteroduplexes foi feita em gel de poliacrilamida a 6%/ Tampão TBE, corado pelo método da prata. A análise de metilação foi feita através do uso de enzimas de restrição (HAL In e HP A n, que não clivam as suas seqüências de reconhecimento de DNA quando estas seqüências estiverem metiladas). Previamente à reação de PCR, o DNA foi digerido com as enzimas citadas. A metilação permitiria a amplificação da seqüência de DNA que estivesse metilada entre as regiões dos primers utilizados. Após a amplificação, as amostras foram submetidas a eletroforese em gel de poliacrilamida a 6%/ Tampão TBE, corado pelo método da prata.Não houve diferença na migração dos fi-agmentos' de DNA após a reação de heteroduplexes, nem foi detectada alteração no padrão de metilação entre os dois grupos de indivíduos. Estes achados indicam que mutações ou alteração no padrão de metilação da região do promotor do COLIA2 compreendida entre -340 e +2 bp provavelmente não estejam relacionadas ao crescimento gengival de portadores de FGR
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Abstract: There is a great interindividual variation in gingival fibroblasts capacity for synthesizing extracellular matrix proteins. This variability is well-documented in patients exhibiting drug-induced gingival overgrowth, but it is still poorly understood in patients with Hereditary Gingival...
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Abstract: There is a great interindividual variation in gingival fibroblasts capacity for synthesizing extracellular matrix proteins. This variability is well-documented in patients exhibiting drug-induced gingival overgrowth, but it is still poorly understood in patients with Hereditary Gingival Fibromatosis (HGF). There is an increase in the amount of normal collagen secreted into the extracellular matrix of the gingiva of patients with HGF. IndividuaIs may carry genetic polymorphisms or mutations, which could determine the partem of fibroblasts response to environmental stimuli.hus, we tried to identify genetic polymorphisms in the promoter of the collagen type I alfa 2 chain (COLIA2) in a group of normal subjects (n=12) and another group of patients with HGF (n=13). Besides, we also tested the hypothesis that undermethylation of this sequence could be related to the overexpression of type I collagen in these patients. lnicially we amplified the COLIA2 promoter region from -340 to +2 bp by PCR, since this is the promoter region were most cis-acting-factors have been identified until now. Thereafter, heteroduplex analysis was performed by heating the samples 5 rninutes to 98°C, chilling at O°C, and maintaining them one hour at 20°C. The samples were run in a 6% polyacrilarnidel TBE gel, which was stained with silver for heteroduplexes detection. Methylation analysis was carried out using restriction enzymes which do not cut DNA when their recognition sites are methylated (HAL 111 e HPA 11). DNA was digested by these enzymes prior to PCR. Successful amplification of a selected fragment of the promoter where restriction sites of these two enzymes are found would mean that the sequence was methylated. The samples were run in a 6% polyacrilarnidel TBE gel, which was stained with silver. There was no difference in the rnigration of DNA fragments after the heteroduplex reaction, neither methylation partem alteration was detected between the two groups analysed. This may indicate that mutations or methylation pattern alteration in the promoter region of the COLIA2 reaching from -340 to +2 bp are probably not involved in the gingival overgrowth affecting patients with HGF
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Estudo do promotor do gene da cadeia alfa 2 do colageno tipo I em portadores de fibromatoge gengival hereditaria
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