Purificação e caracterização de uma proteina toxica isolada das glandulas submandibulares de camundongos machos
Maria Inez Fernandes Poletto
DISSERTAÇÃO
Português
(Broch.)
T/UNICAMP P758p
Piracicaba, SP : [s.n.], 1997.
81f. : il.
Orientador: Carlos Eduardo Pinheiro
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Resumo: Este trabalho foi realizado com o objetivo de isolar e carac terizar quimicamente uma proteína tóxica das glândulas submandibulares de camundongos machos, e observar histológica e macroscopicamente seu efeito biológico. Foram utilizadas 34 g de glândulas submandibulares de camundongos...
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Resumo: Este trabalho foi realizado com o objetivo de isolar e carac terizar quimicamente uma proteína tóxica das glândulas submandibulares de camundongos machos, e observar histológica e macroscopicamente seu efeito biológico. Foram utilizadas 34 g de glândulas submandibulares de camundongos machos, de 3 meses de idade, para a obtenção do extrato glandular cru. Este extrato foi aplicado a uma coluna de DEAE Celulose equilibrada com tampão Tris HCI 0,05 M pH 7,6. A coluna foi lavada com 800 ml do mesmo tampão. O eluente obtido constitui a Fração I. Após a lavagem a coluna foi eluída seqüencialmente, com tampão Tris - NaCI 0,1 M (Fração, II) e tampão Tris - NaCI 0,3 M (Fração III). As frações protéicas foram concentradas por ultrafiltração e avaliada sua atividade tóxica e enzimática (Hidrólise do éster sintético BAPNA). A fração mais ativa (lI), foi dialisada contra tampão Tris - HCI pH 7,6 e aplicada a uma coluna de DEAE-Sephadex equilibrada com o mesmo tampão. As proteínas da coluna foram eluídas seqüencialmente por diferença de pH com os tampões Fosfato 0,1 M pH 7,0; 6,0 e 5,0. A fração mais ativa foi a obtida com tampão Fosfato 0,1 M pH 7,0 ('F IND. 2' 'P IND. 1'). Esta fração foi aplicada a uma coluna de Sephadex G-100 e as frações protéicas foram eluídas com o Tampão Tris HCI 0,05 M pH 7,0. A fração mais ativa, determinada pelos ensaios de toxicidade foi a 'F IND. 2' 'P IND. 1' -1. Eletroforese em gel de poliacrilamida desta fração apresentou uma banda de proteína e a determinação do peso molecular foi realizada utilizando-se da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida a 10% contendo SDS. Os resultados obtidos da cromatografia em DEAE Celulose apresentaram três picos de proteínas, eluídas seqüencialmente por força iônica com soluções de NaCI; a eluição da Fração II da coluna de DEAE Sephadex por diferença de pH apresentou dois picos de proteínas. A fração ativa corresponde ao Pico I, eluído com Tampão Fosfato 0,1 M pH 7,0. Todas as frações apresentaram atividade esterásica, utilizando o BAPNA como substrato. As alterações dos órgãos dos ratos injetados com a fração ativa, mostrou pulmão hemorrágico, pâncreas' com inflamação aguda e degeneração, fígado hemorrágico e estômago engurgitado, repleto de suco gástrico de baixa acidez. A caracterização química e a atividade biológica desta proteína nos leva a concluir que ela é uma esterase com características tóxicas especiais que diferem das outras esterases tóxicas isoladas das glândulas submandibulares de camundongos, o que vem certificar que as glândulas submandibulares de camundongos machos são ricas em proteínas tóxicas e
que a maioria delas apresenta atividade esteroproteolítica Ver menos
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Abstract: The purpose of this study was to isolate and to characterize a toxic protein from male mice submaxillary glands. The crude extract was obtained from 34 gr. of male adult mice. The extract was applied to a column of DEAE Cellulose. Initially the column was washed with 800 ml of Tris-HCL...
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Abstract: The purpose of this study was to isolate and to characterize a toxic protein from male mice submaxillary glands. The crude extract was obtained from 34 gr. of male adult mice. The extract was applied to a column of DEAE Cellulose. Initially the column was washed with 800 ml of Tris-HCL buffer. Then the column was sucessively eluted with Tris-NaCl 0.1M (fraction II), Tris-NaCl .3 M (fraction III). All these fractions were concentrated by ultracentifugation and the biological activity was testes by subcutaneous injection into adult female rats (toxic activity) and enzymatic activity was carried out using BAPNA as substrate. The highest toxic fraction, the fraction II, was dialyzed against Tis-HCL and further fractionated wit DEAE Sephadex A-50 and eluted with a Phosphate 0.1 pH gradient (pH range from 5.0 to 7.0). ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations
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Purificação e caracterização de uma proteina toxica isolada das glandulas submandibulares de camundongos machos
Maria Inez Fernandes Poletto
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Maria Inez Fernandes Poletto
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