Resumo: Amostras autênticas de suco de laranja (Citrus sinensis) das variedades Pera, Natal, Harnlin, Valência, Baía e Lima, amostras autênticas de suco de laranja concentrado (SLC) e água de lavagem da polpa ("pulp wash") e amostras comerciais de suco de laranja fresco (SLF) e congelado foram analisadas quanto à presença dos seguintes compostos: flavanonas glicosídicas (FG), flavonas polimetoxiladas (FPM) e carotenóides e isótopos estáveis de carbono 13, oxigênio 18 e deutério. As flavanonas glicosídicas narirutina e hesperidina foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de UV a 280 nrn. Os níveis de narirutina e hesperidina obtidos em amostras autênticas variaram entre 16 e 142 mgIL e 104 e 537 mgIL, respectivamente. A razão hesperidina/narirutina apresentou diferenças de acordo com a variedade. A variedade Pera apresentou a maior razão (média de 8,3) e a variedade Baía a menor (3,6): Suco de laranja concentrado (após diluição para 12 °Brix) apresentou maiores quantidades de FG com teores de narirutina variando entre 62 e 98 mg/L e de hesperidina, entre 531 e 690 mg/L. Em suco de laranja concentrado, preparado a partir de água de lavagem da polpa, o nível de narirutina variou entre 155 e 239 mg/L e o de hesperidina entre 1089 e 1200 mg/L. A análise de amostras de suco de laranja fresco, obtidas junto a supermercados indicou que o conteúdo de FG da maioria delas (13 a 95 mgIL e 106 a 587 mg/L respectivamente, para narirutina e hesperidina) era similar àqueles encontrados para amostras autênticas. Seis flavonas polimetoxiladas foram determinadas em termos de quantidade relativa e a sinensetina quantificada em amostras de suco de laranja. As FPM foram extraídas com tolueno e analisadas utilizando CLAE com coluna de fase reversa e detecção a 340 nrn. A identificação dos picos foi baseada no espectro de UV-visível e na ordem de eluição descrita pela literatura. Sucos de laranja autênticos continham de 0,06 a 0,12 mg/L de sinensetina com teores mais elevados encontrados nas variedades Pera e Natal. Amostras autênticas obtidas junto a indústrias de suco (SLC e água de lavagem da polpa), e amostras de suco de laranja concentrado e de suco de laranja fresco adquiridas no comércio continham, tipicamente, no mínimo 10 vezes mais sinensetina que aquelas obtidas por extração manual do suco. A razão das áreas dos picos das FPM das diferentes variedades foi examinada utilizando análise canônica discriminante. Este procedimento dístinguiu as variedades Pera e Harnlin das variedades Natal e Valência, quando obtida por extração manual. Da mesma. forma, os sucos obtidos por extração manual foram facilmente distinguidos daqueles de origem industrial, ou seja, suco de laranja concentrado, água de lavagem da polpa e de suco de laranja fresco. Os seguintes carotenóides foram determinados em amostras de suco de laranja: luteína, zeaxantina, J3-criptoxantina, a,-caroteno e J3-caroteno. Os carotenóides foram extraídos com acetato de etila e analisados por CLAE utilizando detector na região do visível a 450 nm. A concentração total de carotenóides em amostras autênticas variou entre 0,11 e 1,21 mg/L, enquanto que J3-caroteno, a mais importante fonte de vitamina A, foi detectado em ordem decrescente de concentração nas variedades Pera, Valência, Hamlin, Natal, Lima e Baía. Os carotenóides totais presentes em amostras de suco de laranja concentrado obtidas das fábricas variaram entre 0,26 e 0,48 mg/L, enquanto que as amostras adquiridas no comércio continham quantidades ligeiramente superiores (0,46 - 0,81 mg/L). Suco concentrado de laranja de água de lavagem da polpa apresentou concentrações muito menores variando entre 0,04 e 0,08 mg/L dos carotenóides totais. Amostras de suco de laranja fresco obtidas no comércio continham carotenóides variando entre 0,04 e 0,55 mg/L, com apenas uma amostra apresentando teores fora da faixa encontrada para as amostras autênticas. Análise isotópica foi a técnica utilizada para caracterizar amostras autênticas de suco de laranja. Fracionamento isotópico natural de, posição específica medido ~r ressonância magnética nuclear (FINPE-RMN) foi empregado para determinar as razões de deutério/hidrogênio, nas posições metil [(D/H)r] e metileno [(D/H)n], do etanol produzido pela fermentação do suco de laranja em condições controladas. Espectrometria de massas da razão dos isótopos estáveis (EMRIE) foi utilizada para determinar a quantidade de carbono 13 (13C/12C, em partes per mil; "%0") no mesmo etanol. EMRIE foi também utilizado para a quantificação de oxigênio 18 e80/160, %o) na água do suco da fruta. As razões médias determinadas para (D/H)y, (D/H)n, 13C;12C e 180/160 em amostras autênticas de suco de laranja foram respectivamente de: 102.3ppm (DP = 1,7); 126,5 ppm (DP = 1,8). -26.5 %o (DP = 0.9) e +2,27 %o (DP = 2.5). Estas técnicas isotópicas (FINPE-RMN e RIEEM de carbono-13) podem ser consideradas importantes ferramentas para determinar simultaneamente a adição não declarada de açúcar de cana e milho (RIEEM) e açúcar de beterraba (FINPE-RMN) em suco de laranja. Nenhuma das amostras do varejo foram adulteradas a níveis que pudessem ser detectados por qualquer dos métodos isotópicos empregados Ver menos

Abstract: Authentic samples of orange juice (Citrus sinensis) from the varieties Pera, Natal, Hamlin, Valência, Baía and Lima, authentic samples of frozen concentrated orange juice (FCOJ) and frozen concentrated orange pulp-wash and retail samples of freshly squeezed orange juice (FSOJ) and FCOJ were analysed for the presence of the following compounds: flavanone glycosides (FG), polymethoxylated flavones (PMF) and carotenoids and stable isotopes: carbon 13, oxygen 18 and deuterium. The flavanone glycosides narirutin and hesperidin were analysed by reversed phase high perfonnance liquid chromatography (HPLC) with UV detection at 280 nrn. The juice from hand squeezed fruit gave narirutin and hesperidin concentrations of 16 - 142 mgIL and 104 - 537 mg/L, respectively. The ratio of hesperidin to narirutin showed varietal differences wjth Pera having the highest ratio (mean 8.3) and Baía the lowest (3.6). Frozen concentrated orange juice (after dilution to 12 °Brix) contained higher quantities of FG with narirutin ranging from 62 to 98 mg/L and hesperidin from 531 to 690 mg/L. In frozen concentrated orange juice pulp-wash the narirutin leveI ranged from 155 to 239 mg/L and hesperidin from 1,089 to 1,200 mg/L. Retail samples offreshly squeezed juice showed that the FG contents of most samples (13 to 95 and 106 to 587 mg/L respectively, for narirutin and hesperidin) were similar to those found for authentcones. Sinensetin was quantified in authentic samples of Brazilian orange juice. In addition, six other polymethoxylated flavones were determined in tenns of their relative amounts. The PMF were extracted into toluene and analysed using reversed phase HPLC with detection at 340 nm. Peak identification was based on the UV -visible spectra and the elution order described in the literature. Hand squeezed orange juices contained from 0.06 to 0.12 mg/L sinensetin, with the highest concentrations being found in the Pera and Natal varieties. Commercial samples of frozen concentrated orange juice, frozen concentrated orange pulp-wash, retail FCOJ and retail freshly squeezed orange juice typically contained at least ten times more' sinensetin than those found for samples squeezed by hand. The PMF peak area ratios for these sample classes were examined further using canonical discriminant analysis. This procedure could distinguish the handsqueezed juices of Pera and Hamlin varieties from those of Natal and Valência. Similarly hand squeezed juice could be readily disticished from the commercial samples of FCOJ, FCOPW, retail FCOJ and retail FSOJ. Lutein, zeaxanthin, ß-cryptoxanthin, JX-carotene andj3-carotene were determined in samples of orange juice. The carotenoids were extracted with ethyl acetate and analysed by reversed phase HPLC with detection at 450 nrn. A concentration range of 0.11 - 1.21 mg/L was determined for total carotenoids in authentic samples with ß-carotene, the most important source of Vitamin A, being found in the highest concentration in the Pera variety, followed by Valência, Hamlin, Natal, Lima and Baía varieties. The total carotenoids present in samples of frozen concentrated orange juice obtained from factories ranged from 0.26 - 0.48 mg/L, while retail samples of this product contained slight1y more (0.46 - 0.81 mg/L). Frozen concentrated orange pulp-wash presented much lower concentrations ranging from 0.04 to 0.08 mg/L of total carotenoids. Samples of retail freshly squeezed orange juice contained carotenoids ranging from 0.04 to 0.55 mg/L, with only one sample out of the range found for authentic samples. Stable isotopic analysis was used to characterise authentic samples of orange juice from Brazil. Site Specific Natural Isotopic Fractionation measured by Nuclear Magnetic Resonance (SNIF-NMR) was used to determine deuterium/hydrogen ratios at the methyl [(D/H)d and methylene [(D/H)u] sites of ethanol. This ethanol was produced by fermentation of orange juice under controlled conditions. Stable Isotope Ratio Mass Spectrometry (SIRMS) was used to determine the amount of carbon-13 (13C/12C, in parts per mil "%0") in the same ethanol. SIRMS was also used to determine the amount of oxygen-18 (180/160, %0) in citrus juice water. The mean ratios determined for (D/H)r, (D/H)n, 13C/12C and 180/160 in the authentic hand squeezed orange juice samples were respectively: 102.3 ppm (SD = 1.7); 126.5 ppm (SD = 1.8), -26.5 %0 (SD = 0.9) and +2.27 %0 (SD = 2.5). These isotopic techniques (SNIF-NMR and carbon 13 SIRMS) are powerful tools to determine simultaneously the undeclared addition of cane and com sugars (SIRMS) and beet sugar (SNIF-NMR) in orange juice. None of the retail samples analysed was adulterated at levels which could be detected by either isotopic method Ver menos