Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e analise numerica de leveduras isoladas da cavidade oral de humanos
Edvaldo Antonio Ribeiro Rosa
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP R71e
Piracicaba, SP : [s.n.], 1997.
109f. : il.
Orientador: Jose Francisco Hofling
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Resumo: O emprego de diferentes metodologias na extração de proteínas intracelulares de leveduras isoladas da cavidade oral de humanos, para aplicação em SDS-PAGE, foi avaliado. As proteínas foram obtidas por disrrupção com pérolas de vidro, pela ação do ácido tricloroacético, por sonicação, por um...
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Resumo: O emprego de diferentes metodologias na extração de proteínas intracelulares de leveduras isoladas da cavidade oral de humanos, para aplicação em SDS-PAGE, foi avaliado. As proteínas foram obtidas por disrrupção com pérolas de vidro, pela ação do ácido tricloroacético, por sonicação, por um tampão de amostra e por criofratura celular através do uso de nitrogênio líquido, e posteriormente aplicadas em SDS-PAGE. Os perfis individuais foram analisados por densitometria de integralização de área e mostraram que a extração por criofratura e sonicação apresentaram os melhores resultados, seguidos pelos métodos de extração por tampão de amostra e pérolas de vidro. O ácido tricloroacético não se demonstrou satisfatório na obtenção de proteínas separáveis por SDS-PAGE.
As proteínas intracelulares totais das espécies Cândida albicans, Cândida krusei, Cândida parapsitosis, Cândida tropicalis e Cândida guilliermondii, obtidas pelo método de" criofratura celular, foram submetidas à SDS-PAGE, em sistema descontínuo, e analisadas por densitometria. Os valores relativos de migração (Rfs) foram convertidos em dados binários e forneceram, após processamento computadorizado, as similaridades fenéticas entre as diferentes linhagens de uma mesma espécie e entre as diferentes espécies do gênero. Os resultados obtidos permitiram, ainda, agrupar as diferentes linhagens e espécies em função de suas similaridades fenéticas, gerando "clusters" compostos por linhagens de uma mesma espécie. Esse resultado sugere que a análise numérica de características baseadas em eletroforegramas de proteínas intracelulares totais de leveduras orais, é um recurso importante na identificação e discriminação de isolados clínicos e nos estudos com ênfase em Taxonomia, Sistemática e biodiversidade
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As proteínas intracelulares totais das espécies Cândida albicans, Cândida krusei, Cândida parapsitosis, Cândida tropicalis e Cândida guilliermondii, obtidas pelo método de" criofratura celular, foram submetidas à SDS-PAGE, em sistema descontínuo, e analisadas por densitometria. Os valores relativos de migração (Rfs) foram convertidos em dados binários e forneceram, após processamento computadorizado, as similaridades fenéticas entre as diferentes linhagens de uma mesma espécie e entre as diferentes espécies do gênero. Os resultados obtidos permitiram, ainda, agrupar as diferentes linhagens e espécies em função de suas similaridades fenéticas, gerando "clusters" compostos por linhagens de uma mesma espécie. Esse resultado sugere que a análise numérica de características baseadas em eletroforegramas de proteínas intracelulares totais de leveduras orais, é um recurso importante na identificação e discriminação de isolados clínicos e nos estudos com ênfase em Taxonomia, Sistemática e biodiversidade
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Abstract: This work aimed to evaluate distincts methodologies for whole-cell proteins extraction of yeasts isolated from oral cavity, for application in polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Such proteins were obtained by disruption with glass beads, trichloroacetic acid action, loading...
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Abstract: This work aimed to evaluate distincts methodologies for whole-cell proteins extraction of yeasts isolated from oral cavity, for application in polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Such proteins were obtained by disruption with glass beads, trichloroacetic acid action, loading sample buffer action, sonication and cellular cryofracture by liquid nitrogen and applied in polyacrylamide gel electrophoresis. The profiles were analised by area integralization densitometry and showed that the best electrophoretic profile for proteins were obtained by cellular cryofracture and sonication. Glass beads and loading sample buffer showed less satisfactories results and the trichloroacetic acid method was not able to disclose applicable proteins bands to be used in studies of relationships of Candida species. The experimental results let to the observation that the species studied by using liquid nitrogen (cellular cryofracture method) showed the best electrophoretic profiles when compared to other metodologies. At the second part of this work, the whole-cell proteins were obtained by cellular cryofracture, separated by SDS-PAGE in a discontinous gel system and analised by densitometry of peaks detection. The migration distance values (Rfs) were converted in binominal data that after computer-process, gave the phenetic similarities among the different strains within the same species and among the different species within the same genera. The results obtained alowed to cluster the different strains and species by their phenetic similarities, giving clusters composed uniquely by specimen of the same species. This result suggests that the numerical analysis of characteristics based on electrophoregrams of whole-cell proteins of oral yeasts is a tool with great discriminately potential in studies of identification, sistematics and biodiversity
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Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e analise numerica de leveduras isoladas da cavidade oral de humanos
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