Analise de alterações nucleares e citoplasmaticas no hepatocito de figado obtido para o transplante apos paralização dos batimentos cardiacos do doador
Jose Humberto Lacerda Rodrigues
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP R618a
Campinas, SP : [s.n.], 1997.
66f. : il.
Orientadores: Guilherme Barenhauser Leite, Benedicto de Campos Vidal
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Resumo: O transplante de figado obtido após paralisação dos batimentos cardíacos do doador, é uma alternativa para a elevação do número de doadores. Visando analisar o comportamento do órgão obtido nessas condições, este estudo teve por objetivo detectar variações da gordura citop!asmática e...
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Resumo: O transplante de figado obtido após paralisação dos batimentos cardíacos do doador, é uma alternativa para a elevação do número de doadores. Visando analisar o comportamento do órgão obtido nessas condições, este estudo teve por objetivo detectar variações da gordura citop!asmática e alterações do núcleo de hepatócitos de figados submetidos a períodos distintos de isquemia normotérmica e idênticos de isquemia hipotérmica. Foram utilizados 25 ratos da raça Wistar, de mesma idade e linhagem, divididos em dois grupos compostos por 12 (grupo I) e 13 (grupo 11) animais, cujos pesos eram semelhantes (p=0,0030). Os do grupo I foram submetidos a laparotomia e a procedimento padrão para obtenção de enxerto para transplante. O órgão foi retirado e mantido, por quatro horas, em solução de Euro-Collins a 4°C. O mesmo procedimento foi realizado no grupo 11, trinta minutos após a paralisação 'dos batimentos cardíacos. A gordura citoplasmática foi analisada visualmente em cortes de fragmentos hepáticos, corados com solução de Sudan Black B, onde notou-se um maior acúmulo, no grupo 11, predominantemente em região centrolobular. Os núcleos foram avaliados por morfometria manual com equipamento KontronMop- Videoplan @ aferindo-se Área, Perímetro e Fator Forma, em decalques ("imprints") levados à reação de Feulgen. Constatou-se que os núcleos do grupo 11 apresentavam Área e Perímetro nucleares maiores (p=O,OOOle p=O,OOOI). Os valores de Fator Forma foram semelhantes (p=0,1780) e próximos da unidade (1), próprios de estruturas com forma esférica. Visando substanciar matematicamente os dados obtidos visualmente sobre a gordura citoplasmática e confirn1ar os valores da medição manual dos núcleos dos hepatócitos, realizou-se análise morfométrica digital em algumas amostras ao acaso, com equipamento Global Lab Image @ medindo-se Área, Perímetro, Fator Forma e Absorbâncias Média (indicador de concentração) e Total (Absorbância Média x Área). Os parâmetros avaliados sobre a gordura foram Área e Absorbância Média A análise digital confirmou uma maior presença e concentração de gordura nos citoplasmas de hepatócitos do grupo 11. A heterogeneidade das áreas dificulta uma aferição mais apurada, demonstrando que o método necessita de aperfeiçoamentos. Quanto ao núcleo, a aferição digital de Área, Perímetro e Fator Forma confirmou os dados obtidos por morfometria manual. Os valores de Absorbância Média foram menores no grupo II e os de Absorbância Total considerados semelhantes entre os dois grupos, sugerindo não haver alteração no conteúdo nuclear. Os resultados deste trabalho indicam que o hepatócito, de figados obtidos após 30 minutos de isquemia normotérmica e mantidos em solução de preservação a 4°C por quatro horas, contém uma quantidade superior de gordura em seu citoplasma, apresentando área e perímetro nuclear maiores, quando comparado ao de figados mantidos em solução de preservação a 4°C por quatro horas. Os núcleos dos hepatócÍtos de ambos os grupos mantiveram a forma esférica
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Abstract: Liver transplantation from non-heart-beating donor is an alternative for the rise of the donors' number. With the intention of analyzing the behavior of the obtained organ in these conditions, this study aimed to detect variances of the cytoplasmic fat and alterations of hepatocytes...
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Abstract: Liver transplantation from non-heart-beating donor is an alternative for the rise of the donors' number. With the intention of analyzing the behavior of the obtained organ in these conditions, this study aimed to detect variances of the cytoplasmic fat and alterations of hepatocytes nucleus of livers submitted to a distinct periods of the normothermic ischemia and identical of hypothermic ischemia. Twenty-five Wistar rats were used, bearing the same age and straim, divided into two groups compounded by 12 (group I) and 13 (group 11) animals, which weights were similar (p=O,OO30). Those from group I undergone laparotomy and the standard procedure for obtaining graft for transplantation. The organ was withdrawn and maintained, for four hours, in a Euro-Collins solution at 4°C. The same procedure was performed in the group 11, thirty minutes after the cardiac standstill.
The cytoplasmic fat was analized visualy in cuts of hepatic fragments, stained with Sudan Black B solution, and a great accumulation was noted, in the group lI, predominantly in the centrilobular region. Nuclei were analized by manual morphometry with Kontron-Mop- Videoplan @ equipment checking Area, Perimeter and Roundness, in imprints taken to a Feulgen reaction. It was certified that the nuclei of the group 11 presented greater nuclear Area and Perimeter (p=O,OOOl, p=O,OOOl). Values ofRoundness were similar (p=O,1780) and near the unit (1), private of the structures with spherical shape. With the intention of emphasizing mathmatically the obtained data visualy over the cytoplasmic fat, and certify the values of manual measurement of hepatocyts nuclei, digital morphometric analysis was performed in random samples, with Global Lab Image @ equipament measuring Area, Perimeter, Optical Density ( concentration indicator), Integrated Optical Density ( Optical Density x Area) and Roundness. Parameters analised over the fat were Area and Optical Density. The digital analysis confirmed a great presence and concentration of fat in the hepatocyte citoplasms of group lI. The heterogeneity of the areas makes a more accurate checking difficult, showing that the method needs improvement. According to the nucleus, the digital checking of the Area, Perimeter and Roundness confumed the obtained data by manual morphometry. The Optical Density values were smaller in the group II and those of Integrated Optical Density similar between the two groups, suggesting no alteration in the nuclear contents. W ork results indicate that the hepatocyte, from obtained livers, after thirty minutes of normothermic ischemia ànd mainteined in a preservation solution at 4°C over four hours, comprise a higher quantity of fat in its cytoplasm, presenting greater nuclear Area and Perimeter, when compared to the livers maintained in a preservation solution at 4°C over four hours. Hepatocyte nuclei ofbo.th groups maintained the spherical shape Ver menos
The cytoplasmic fat was analized visualy in cuts of hepatic fragments, stained with Sudan Black B solution, and a great accumulation was noted, in the group lI, predominantly in the centrilobular region. Nuclei were analized by manual morphometry with Kontron-Mop- Videoplan @ equipment checking Area, Perimeter and Roundness, in imprints taken to a Feulgen reaction. It was certified that the nuclei of the group 11 presented greater nuclear Area and Perimeter (p=O,OOOl, p=O,OOOl). Values ofRoundness were similar (p=O,1780) and near the unit (1), private of the structures with spherical shape. With the intention of emphasizing mathmatically the obtained data visualy over the cytoplasmic fat, and certify the values of manual measurement of hepatocyts nuclei, digital morphometric analysis was performed in random samples, with Global Lab Image @ equipament measuring Area, Perimeter, Optical Density ( concentration indicator), Integrated Optical Density ( Optical Density x Area) and Roundness. Parameters analised over the fat were Area and Optical Density. The digital analysis confirmed a great presence and concentration of fat in the hepatocyte citoplasms of group lI. The heterogeneity of the areas makes a more accurate checking difficult, showing that the method needs improvement. According to the nucleus, the digital checking of the Area, Perimeter and Roundness confumed the obtained data by manual morphometry. The Optical Density values were smaller in the group II and those of Integrated Optical Density similar between the two groups, suggesting no alteration in the nuclear contents. W ork results indicate that the hepatocyte, from obtained livers, after thirty minutes of normothermic ischemia ànd mainteined in a preservation solution at 4°C over four hours, comprise a higher quantity of fat in its cytoplasm, presenting greater nuclear Area and Perimeter, when compared to the livers maintained in a preservation solution at 4°C over four hours. Hepatocyte nuclei ofbo.th groups maintained the spherical shape Ver menos
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