Alterações morfofisiologicas celulares e nucleares em celulas epiteliais mamarias humanas transformadas por benzo [a] pireno e transfectadas com o oncogene c-Ha-ras : aspectos citoquimicos e de analise de imagem
Luis Fernando Barbisan
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP B234a
Campinas, SP : [s.n.], 1997.
116f. : il.
Orientador: Maria Luiza S. Mello
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: Alterações morfofisiológicas celulares enucleares foram investigadas através de métodos citoquímicos e de análise de imagem em células epiteliais mamárias humanas, MCF-IOF, transformadas com o benzo[a]pireno, e que expressam diferentes estágios da progressão tumoral (clones BPl, BPI-E e...
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Resumo: Alterações morfofisiológicas celulares enucleares foram investigadas através de métodos citoquímicos e de análise de imagem em células epiteliais mamárias humanas, MCF-IOF, transformadas com o benzo[a]pireno, e que expressam diferentes estágios da progressão tumoral (clones BPl, BPI-E e BPI-El), e, adicionalmente, num clone transfectado com o oncogene c-Ha-ras (BPl- Tras). Um aumento no índice mitótico foi observado com a progressão neoplásica. Por outro lado, um aumento em células apoptóticas, evidenciadas por uma variante do método de concentração crítica de eletrólitos, foi observado somente nas células BPI-Tras. Relocação de RNA durante a mitose, identificável por resposta metacromática, não diferiu quando se compararam células MCF-lOF transformadas e não transformadas, exceto com relação à presença de corpos semelhantes a nucléolos ("nucleolus-like bodies") encontrados próximos à placa cromossômica na metáfase ou ao fuso nas fases mitóticas subsequentes. Estes corpos não foram abundantes nas células MCF-lOF não transformadas e se tornaram mais escassos ainda nos clones celulares transformados, talvez por menores quantidades de RNA excedentes estarem envolvidas em tais condições. Pleomorfismo nuclear foi predominante nos clones celulares que expressam o fenótipo tumorigênico (BPI-E, BPI-El e BPI-Tras). Anormalidades nucleares tais como, cariorréxis, cariólise, multinucleação e micronúcleos foram mais freqüentes nas células BPl- Tras. Todos os clones exibiram células binucleadas e gigantes, mas nenhuma alteração nas suas frequências puderam ser detectadas quando os vários clones celulares foram comparados entre si. Alguns fenótipos nucleares puderam ser caracterizados nas células transformadas e não transformadas. Entretranto, estes poderiam estar associados com a progressão neoplásica, ou mesmo, com as diferentes fases do ciclo celular. Uma diminuição na área, perímetro e fator forma nucleares, mas um aumento na área e perímetro nucleolares foram encontrados com o avanço do processo tumorigênico nas células transformadas com o benzo[a]pireno. Estas alterações podem ser devidas a uma diminuição nas quantidades Feulgen-DNA (hipodiploidia) e/ou a um aumento nos estados de empacotamento cromatínico, embora um aumento na atividade transcripcional ocorra a nível nucleolar. Em particular, os tamanhos e perímetros nucleares das células BPl- Tras aumentaram quando comparados aos das células BP1, BPI-E e BPI-El, mas não diferiram dos valores para células MCF-IOF não transformadas. O aumento na área e no perímetro nuclear pode estar associado a uma certa aneuploidia promovida pela transfecção com o oncogene c-Ha-ras. Os tamanhos e número de nucléolos nas células BPI-E e BPI-Tras diferiram dos das outras células, e, um aumento da tamanho nucleolar com uma diminuição do número de nucléolos foi observado ocorrer nas células BPI-E e BPI-Tras. Fusão nucleolar e aumento em tamanho certamente refletem atividades metabólicas aumentadas nas células BPI-E e BP1 Tras quando comparadas aos outros clones celulares. Os dados de morfometria nuclear nos clones celulares transformados pelo benzo[a]pireno e transfectados com o oncogene c-Ha-ras indicam a existência de mecanismos morfofuncionais distintos e complexos que envolvem a progressão neoplásica de células MCF-lOF in vitro. O aumento na frequência de células micronucleadas e multinucleadas e aneuploidia nas células BP 1- Tras poderia estar relacionado à instabilidade genética induzida pela transfecção do oncogeneraso
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Abstract: Cellular and nuclear morphophysiological changes were investigated by cytochemistry and image analysis in clones of human breast epithelial cells, MCF-I0F, transformed by benzo[a]pyrene and expressing different stages of progression to neoplastic transformation (BP1, BPI-E and BPI-El...
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Abstract: Cellular and nuclear morphophysiological changes were investigated by cytochemistry and image analysis in clones of human breast epithelial cells, MCF-I0F, transformed by benzo[a]pyrene and expressing different stages of progression to neoplastic transformation (BP1, BPI-E and BPI-El clones), and additionally transfected with the c-Ha-ras oncogene (BP 1- Tras). A mitotic index increase was observed with the neoplastic progression. On the other hand, an increase in frequency of apoptotic celIs, as identified by a critical electrolyte concentration method, was only observed in BP 1- Tras celIs. RNA relocation during mitosis, identified by a metachromatic response, was found to differ when comparing nontransformed and transformed MCF-lOF cells. The exception refers to the presence of nucleolus-like bodies found close to the chromosomal plate at metaphase or to the spindle in subsequent mitotic phases. These bodies were not abundant in nontransformed IvlCF-l OF celIs, and become much more scarce in the transformed celIs, possibly due to decrease in surplus RNA involved. Nuclear pleomorphism was predominant in the cell clones expressmg tumorigenesis phenotypes (BPI-E, BPI-El and BP1- Tras cells). Nuclear abnormalities such as karyorhexis, karyolysis, multinucleation and micronucleation were more frequent in BP 1- Tras celIs. AlI celI clones exhibited binucleate and giant celIs, but no change in their frequencies could be detected when comparing the various cell clones. Some nuclear phenotypes could be characterized in the nontrasformed and transformed cells. However, they may be associated with the neoplastic progression or even with different cell cycle phases. A decrease in nuclear area, perimeter and form fator, but an increase in nucleolar area and perimeter were found with advancing tumorigenesis process in the benzo[ a ]pyrene-transformed cells. These changes may be due to a decrease in Feulgen-DNA amounts (hypodiploidy) and/or increase in chromatin packing states, although an increased transcriptional activity occurs at the nucleolar leveI. In particular, the nuclear sizes and perimeter of BP 1- Tras cells increased as compared to those of BP1, BPI-E and BPI-El cells, but were not found to differ from values ofthe nontransformed MCF-I0F cells. The nuclear area and perimeter increase may be associated to a certain aneuploidy degree promoted by the rastransfection. Nucleolus sizes and numbers in BPI-E and BPI-Tras cells were found to differ from those ofMCF-lOF, BPl and BPI-El cells, and nucleolar sizes increasing with the decrease in nucleolus numbers were observed in BPI-E BP1 Tras cells. Nucleolus fusion and enlargement certainly reflect metabolic activities enhanced in BPI-E and BPI-Tras cells when comparing these to the other cell clones. The nuclear morphometry data on the benzo[ a ]pyrene-transformed cells and on those additionally transfected by the c-Ha-ras oncogene indicated the existence of complex and distint morphofunctional mechanisms involving of the in vitro transformation of the MCF-I0F cells. The increase in frequency of micronuclei and multinucleate cells and in aneuploidy in the BP 1- Tras cell clone could be related to the genomic instability induced by ras-transfection
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Alterações morfofisiologicas celulares e nucleares em celulas epiteliais mamarias humanas transformadas por benzo [a] pireno e transfectadas com o oncogene c-Ha-ras : aspectos citoquimicos e de analise de imagem
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