Orientador: Mary Anne Heide Dolder

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: Foram realizados sete experimentos de cultura de túbulo seminíferos abrangendo variações das condições de fragmentação, manipulação e de cultura. As variações aplicadas à cultura visaram minimizar os sinais de desorganização e degeneração tecidual. Verificou-se que as técnicas de...

Resumo: Foram realizados sete experimentos de cultura de túbulo seminíferos abrangendo variações das condições de fragmentação, manipulação e de cultura. As variações aplicadas à cultura visaram minimizar os sinais de desorganização e degeneração tecidual. Verificou-se que as técnicas de fragmentação introduziram alterações na organização do epitélio seminífero, como o deslocamento de populações celulares germinativas em direção ao lúmen tubular. Como conseqüência desta movimentação celular apareceram também espaços intercelulares no epitélio germinativo. Esta desorganização tecidual interfere na integridade das interações entre as populações celulares presentes, necessárias para seu desenvolvimento. Apareceram sinais de degeneração celular progressivos como a descaracterização das células de Sertoli, acúmulo de gotículas de Iipídios, vacuolização nuclear e citoplasmática e presença de resíduos celulares. As alterações não puderam ser revertidas. O teste de complementos no meio de cultura (soro fetal bovino-SFB, e hormônio folículo estimulante-FSH) objetivou o aprimoramento da técnica. A presença de SFB ativou populações celulares inespecíficas, as células mióides, causando alterações morfológicas nestas cél ulas, como o arredondamento nuclear. Estas células cresceram desordenadamente e a parede tubular apresentou-se espessada. Já a presença de FSH teve efeito positivo, retardando o aparecimento dos sinais de degeneração. Foi importante estabelecer quais as condições ideais de cultura, meio HAMFlO:DMEM, na presença de HEPES(15mMlml), bicarbonato de sódio (1,2g/1), BSA(1g/I), MIX(O,lmMll), FSH(O,4ug/ml) e gentamicina(lOO/-lg/ml), em estufa a 32°C, por um período de 3 dias. Nestas condições obtivemos o mínimo possível de alterações do epitélio seminífero. Estabelecemos então um padrão das alterações introduzidas através da técnica de cultura em si. Frente a este controle foram realizados dois experimentos de aplicação do cádmio às culturas de túbulos seminíferos. Estes experimentos foram realizados num período de três dias, com fixações diárias, utilizando as condições de cultura pré-estabelecidas. Foram testadas três concentrações do metal (1;10 e IOO/-lM) durante uma hora de exposição. Também foi realizado um controle com exposição direta dos túbulos seminíferos em cultura ao cádmio I/-lM. Foi constatada a intensificação e o aceleramento dos sinais de degeneração devido à presença do metal no meio de cultura

Abstract: Cultures of seminiferous tubules were made according to seven experiments including variations of fragmentation conditions, of manipulation and of culture medium. Tubule fragmentation and manipulaÍion introduced disturbances of the eminiferous epithelium, such as the dislocation of germ...

Abstract: Cultures of seminiferous tubules were made according to seven experiments including variations of fragmentation conditions, of manipulation and of culture medium. Tubule fragmentation and manipulaÍion introduced disturbances of the eminiferous epithelium, such as the dislocation of germ cells directed towards the tubular lumen. As a consequence of this movement there were intercellular spaces. The epithelial integrity is fundamental for cellular interactions necessary for cellular development. During the culture period cellular degeneration occurred progressively. Morphological disturbances of the Sertoli cells, marked accumulation of lipid droplets, nuclear and citoplasmatic vacuolization and the presence of cellular debris were observed. The addition of calffetal serum (CFS) to the medi um activated myoid cell populations and caused morphological alterations of these cells (such as nuclear rounding). These changes were accompanied by the thickening of the tubular wall. On the other hand the presence ofFSH in the culture medium was very positive, delaying and reducing degeneration signs. It was important to establish the disturbances caused by the culture techniques and the period during which the seminiferous tubules can be maintained with minimum alterations to be used as a control situation. Two experiments were made wíth cadmium applied to the semíníferous tubules cultures. These experiments were based on culture conditions established by the previous experiments and they were monitored with daily fixations during a three day period. Three concentrations of this metal (1, 10 e 1O0_M) were tested during a one hour period of exposition. A control of direct exposition oftubules to the metal (l_M) was carried out entire culture período As a consequence of cadmium present ín the culture, degeneration was intensified and accelerated. It was established that cadmium can act directly on germ cells causing degenerative alterations