Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: o DNA ribossomal de três dípteros de importância médico-veterinária (Haematobia irritans, Muscina stabulans e Chrysomya putoria) foi analisado através do estudo dos sítios de restrição para as enzimas Eco RI, Bam HI, Hind 111, Pst I, Sal I, BgI 11 e Sma I em digestões simples e duplas. Os...

Resumo: o DNA ribossomal de três dípteros de importância médico-veterinária (Haematobia irritans, Muscina stabulans e Chrysomya putoria) foi analisado através do estudo dos sítios de restrição para as enzimas Eco RI, Bam HI, Hind 111, Pst I, Sal I, BgI 11 e Sma I em digestões simples e duplas. Os plasmídios recombinantes pDm 238, HM 456, HM123 e pc Hi 18 foram marcados pelo método de "random priming" e detectados por quimioluminescência. Os tamanhos estimados das unidades de repetição dos rDNAs de H irritans, M. stabulans e C. putoria são, respectivamente, 9,8; 9,0 e 11,0 kb. Comparando-se os mapas de restrição das três espécies entre si e com o de Drosophila melanogaster e de Calliphora erytrocephala verificou-se que os sítios para as enzimas Eco RI, Hind 111, BgI 11 e Sma I, da região codificadora 18S, e Pst I, na região transcrita interna (ITS), são altamente conservados. Na região do 28S em M stabulans e C. putoria está presente o mesmo número de sítios Hind 111, BgI 11, e Sma I, porém localizamse em pontos diferentes. No rDNA das três espécies estudadas não foi identificado sítio para Bam HI e em C. putoria foi encontrado um segundo sítio Eco RI, localizado na região IGS. Apenas na espécie H irritans foi possível localizar um sítio BgI 11 na região IGS. Os mapas de restrição de C. putoria e C. erytrocephala, que pertencem à família Calliphoridae, são mais semelhantes entre si do que H irritans e M. stabulans, da família Muscidae. A presença de inserções no gene 28S, bem como de variação intraespecífica no tamanho de IGS, a exemplo do que é descrito para outros dípteros, seriam explicações para a presença de fragmentos adicionais, de bandas difusas e de fragmentos com tamanhos maiores ou menores do que os possíveis no mapa de restrição das três espécies. As enzimas Eco RI, BgI 11 e Hind 111 produzem um padrão de bandas, com a utilização da sonda pDm 238, que permite fazer a distinção do rDNA das três espécies entre si. A localização dos sítios de restrição do rDNA destas espécies poderá servir de base para estudos futuros de clonagem e sequenciamento, bem como estudos filogenéticos

Abstract: Three species of flies (Haematabia irritans, Muscina stabulans, and Chrysamya putaria) which present economic and sanitary importance had their rDNA studied and compared. Genomic DNA obtained by phenol/chloroform extraction of proteins and ethanol precipitation of the DNA was digested with...

Abstract: Three species of flies (Haematabia irritans, Muscina stabulans, and Chrysamya putaria) which present economic and sanitary importance had their rDNA studied and compared. Genomic DNA obtained by phenol/chloroform extraction of proteins and ethanol precipitation of the DNA was digested with the restriction enzymes: Eco RI, Bam HI, Hind lU, Pst I, Sal I, BgI U and Sma I either in simple or double digestions. Probing DNA from each species with the recombinants plasmids pDm 238, HM 123, HM 456 and pcHi 18, identified some conserved sites and a few unique ones on each rDNA. The conserved sites among the three studied species plus two species available from literature, Drasaphila melanagaster and Callyphara erytracephala were: Eco RI, Hind lU, BgI U and Sma I located in the coding region 18S and Pst I Ín the internal transcribed egion (ITS). No Bam HI site was identified in any of the three flies. M stabulans and C. putaria presented the same number of sites Hind lU, BgI U and Sma I in the coding region 28S but they mapped in different regions. Furthermore, C. putaria was the only fly presenting a second Eco RI site located in the intergenic region (IGS). C. putaria had the longest rDNA cistron which was estimated to be 11 Kb, when compared to H irritans (9.8Kb) and to M stabulans (9.0Kb). Restriction maps of the rDNA cistron in C. putaria and the other calliphorid, Calliphara erytracephala, are more similar than maps of the two muscid, H irritans and M stabulans. A number of variant bands detected in some digestions may be explained by the presence of insertions in the 28S region as well as intraspecific variation in the IGS length as described in other Diptera. Species-specific patterns were identified for the three flies when the DNA was igested with each of the following restriction enzymes Eco RI, BgI U and Hind lU (probed with pDm 238)