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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Organoides intestinais como ferramenta para rastreio de moduladores da CFTR na população miscigenada com fibrose cística do Brasil
Title Alternative: Intestinal organoids as a tool for screening CFTR modulators in the miscegenated population with Cystic Fibrosis in Brazil
Author: Silva Leite, Gabriela da, 1995-
Advisor: Ribeiro, Antonio Fernando, 1948-
Abstract: Resumo: A Fibrose Cística (FC) é uma doença autossômica recessiva causada por variantes no gene CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator) localizado no braço longo do cromossoma 7. Esse gene codifica uma proteína de membrana de mesmo nome, que se localiza na membrana apical das células epiteliais com a função de um canal para o transporte de íons Cloreto e de bicarbonato, sendo essencial para manutenção, equilíbrio eletroquímico e pH do líquido nas superfícies dos tecidos epiteliais. Estão descritas mais de 2000 variantes no gene CFTR, algumas delas relacionam-se com alterações qualitativas ou quantitativas da proteína e consequente ausência ou diminuição de sua função, causando manifestações clínicas decorrentes de danos em órgãos dos sistemas digestório e respiratório de forma progressiva. O tratamento da FC é orientado no sentido a retardar a progressão dos danos funcionais nos órgãos acometidos. Recentemente foram desenvolvidos fármacos com ação corretora e/ou potencializadora na função da proteína CFTR. Para a validação desses fármacos, antes de testes clínicos são realizados ensaios in vitro. Culturas primarias tridimensionais (3D) que se organizam formando "mini órgãos" in vitro, isolados a partir de pequenas biópsias retais, são os Organoides Intestinais (OI), que possibilitam avaliar variações na função da CFTR, em células oriundas de indivíduos com FC na presença dos fármacos candidatos. Objetivo: O objetivo deste estudo foi de padronizar a técnica de isolamento e cultivo de OI para testes in vitro de moduladores da CFTR, no laboratório de Fibrose cística (LAFIC) do Centro de Investigação em Pediatria (CIPED) da Faculdade de Ciências Médicas (FCM) da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), e a escrita do artigo de revisão. Material e Método: Organoides intestinais foram desenvolvidos de 3 pacientes FC em Portugal no Institudo BioISI (Biosystems & Integrative Sciences) da Faculdade de Lisboa e de 6 Pacientes FC, no LAFIC seguindo técnica já padronizada em Portugal. Resultados: Dos 3 pacientes de Portugal, as culturas foram efetivas e foi possível testar a ação dos fármacos candidatos. No Brasil as biópsias retais de 6 pacientes FC foram submetidas a cultura para formação dos OI, tendo sucesso em uma cultura com formação de organoides que estão crio preservados para os testes com fármacos candidatos, houve contaminação de uma cultura e insucesso de cultivo em 4 culturas que associamos à perda de validade do meio de cultura. Os artigos para a revisão foram selecionados de acordo com a seleção pelos critérios de busca e refinados por título, em seguida pela leitura dos resumos e, finalmente, pela relevância avaliada pela leitura dos textos na íntegra, ao final da busca, os artigos selecionados foram utilizados para a elaboração da revisão. Conclusão: A padronização da técnica de isolamento e cultura de OI no LAFIC está em andamento, já é possível isolar e cultivar os OI. Essa técnica é recente deverá trazer um grande avanço nos estudos da FC

Abstract: Cystic Fibrosis (CF) is an autosomal recessive disease caused by variants in the CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator) gene located on the long arm of chromosome 7. This gene encodes a membrane protein of the same name, which is located on the apical membrane of epithelial cells with the function of a channel for the transport of chloride and bicarbonate ions, being essential for maintenance, electrochemical balance and liquid pH on the surfaces of epithelial tissues. More than 2000 variants are described in the CFTR gene, some of which are related to qualitative or quantitative changes in the protein and the consequent absence or reduction of its function, causing clinical manifestations resulting from damage to organs of the digestive and respiratory systems in a progressive way. CF treatment is aimed at slowing the progression of functional damage to the affected organs. Recently, drugs with corrective and / or potentiating action on the function of the CFTR protein have been developed. For the validation of these drugs, in vitro tests are performed before clinical tests. Three-dimensional (3D) primary cultures that organize themselves into in vitro "mini organs", isolated from small rectal biopsies, are the Intestinal Organoids (OI), which make it possible to evaluate variations in the function of the CFTR, in cells originating from individuals with CF in the presence of candidate drugs. Objective: The objective of this study was to standardize the technique of isolation and cultivation of OI for in vitro tests of CFTR modulators, in the Cystic Fibrosis laboratory (LAFIC) of the Pediatric Research Center (CIPED) of the Faculty of Medical Sciences (FCM) of the State University of Campinas (UNICAMP), and the writing of the review article. Material and Method: Intestinal organoids were developed from 3 CF patients in Portugal at the BioISI Institute (Biosystems & Integrative Sciences) of the Faculty of Lisbon and 6 FC Patients at LAFIC following a technique already standardized in Portugal. Results: Of the 3 patients from Portugal, the cultures were effective and it was possible to test the action of the candidate drugs. In Brazil, rectal biopsies of 6 CF patients were cultured for the formation of OI, with success in a culture with organoid formation that are preserved for testing with candidate drugs, contamination of one culture and failure of culture in 4 cultures that we associate with the loss of validity of the culture medium. The articles for the review were selected according to the selection by the search criteria and refined by title, then by reading the abstracts and, finally, by the relevance assessed by reading the texts in full, at the end of the search, the selected articles were used to prepare the review. Conclusion: The standardization of the technique of isolation and culture of OI in LAFIC is in progress, it is already possible to isolate and cultivate OI. This technique is recent and should bring a great advance in CF studies
Subject: Fibrose cística
Regulador de condutância transmembrana em fibrose cística
Moduladores de transporte de membrana
Organoides
Language: Multilíngua
Editor: [s.n.]
Citation: SILVA LEITE, Gabriela da. Organoides intestinais como ferramenta para rastreio de moduladores da CFTR na população miscigenada com fibrose cística do Brasil. 2021. 1 recurso online (59 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP.
Date Issue: 2021
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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