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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Fatores de virulência e subtipagem de Staphylococcus aureus isolados de laticínios orgânicos e convencionais no estado de São Paulo
Title Alternative: Virulence factor and subtyping of Staphylococcus aureus isolated from organic and conventional dairy in the state of São Paulo, Brazil
Author: Candido, Talita Junia Silva, 1992-
Advisor: Silva, Nathalia Cristina Cirone, 1986-
Abstract: Resumo: As doenças transmitidas por alimentos (DTAs) são causadas pela ingestão de água ou alimentos contaminados. O Staphylococcus aureus é capaz de produzir enterotoxinas e é um dos agentes mais comuns responsáveis por surtos de intoxicação alimentar. A intoxicação é decorrente da ingestão de enterotoxinas pré-formadas no alimento contaminado pela bactéria, a qual pode continuar viável ou não. Entre os alimentos envolvidos em intoxicação alimentar estafilocócica, destaca-se o queijo, devido ao S. aureus ser encontrado tanto no leite cru como em manipuladores. O objetivo desse trabalho foi isolar, identificar e caracterizar molecularmente S. aureus isolados da cadeia de processamento de queijo tipo Minas frescal orgânico e convencional. Foram realizadas coletas em seis laticínios dentro do Estado de São Paulo em um raio de até 200 quilômetros de Campinas, com duas coletas em cada um. As coletas realizadas em cada visita foram: leite cru, leite pasteurizado, manipulador, ambiente (equipamento, utensílio, piso) e produto final. A partir das amostras coletadas fez-se o isolamento da bactéria alvo. As amostras foram incubadas em Agar Baird Parker (BP) e foram isoladas as colônias características com posterior realização de testes bioquímicos e reação em cadeia polimerase (PCR) para a identificação de S. aureus. Após a confirmação da espécie, foi realizada a pesquisa dos genes codificadores de enterotoxinas (sea-see, seg-sej) por PCR e subtipagem das cepas por spa typing, agr type e eletroforese em campo pulsado (PFGE). Foram identificados 38 S. aureus, sendo 18 (47,36%) de laticínios orgânicos e 20 (52,63%) de laticínios convencionais. Pelo menos 34 isolados (89,47%) apresentaram genes produtores de enterotoxinas, sendo seg em 25 isolados (65,79%), sei em 18 (47,37%), seb em 7 isolados (18,42%), sej em 8 (21,05%), seh em 5 (13,16%) e não foram identificados genes sea, sec, sed e see. O gene agr I foi encontrado em 5 isolados (13,16%), agr II em 11 (29,0%), agr III em 17 (44,74%), agr IV em 3 (7,89%) e não foi possível identificar agr em 2 isolados (5,3%). Foram identificados 14 Spa type diferentes, os mais frequentes foram o t021 em 8 isolados (21,05%), o t127 em 5 isolados (13,16%) e o t1062 em 3 isolados (7,89%). Para a técnica de PFGE, no total foram 17 clusters diferentes, sendo 1 cluster com 5 isolados, 1 com 4, 2 com 3, 4 com 2 e 9 com apenas 1. Dos 32 perfis 4 clusters apresentaram 2 clones com similaridade de 100%. A abundância de isolados foi parecida entre os laticínios convencionais e orgânicos. Os resultados obtidos no PFGE corroboram na identificação dos principais pontos de transmissão das estirpes de S. aureus, como a salmoura, utensílios (lira), leite cru e pasteurizado utilizados para produção do queijo Minas frescal

Abstract: Foodborne illnesses are caused by ingestion of contaminated food or water. Staphylococcus aureus is able to produce enterotoxins and is one of the most common agent responsible for outbreaks of food poisoning. Intoxication is due to the ingestion of preformed enterotoxins in the food contaminated by the bacteria, which may continue viable. Among the foods involved in staphylococcal food poisoning, the cheese stands out due to the fact that S. aureus is found both in raw milk and in manipulators. The objective of this work was to isolate, identify and molecularly characterize S. aureus isolated from the processing chain of organic and conventional Minas frescal type cheese. Samples were collected from six dairies in the State of São Paulo within a radius of up to 200 kilometers from Campinas, with two collections in each dairy. The following samples were collected: raw milk, pasteurized milk, manipulators, environment (equipment, utensil, floor) and final product in order to isolate the target bacterium. Afterwards, the samples were incubated in Baird Parker Agar (BP) and the characteristic colonies were isolated with subsequent biochemical tests and polymerase chain reaction (PCR) for the identification of S. aureus. After confirmation of the species, the enterotoxin encoding genes (sea-see, seg-sej) were investigated by PCR and subtyping of spa-typing, agr type and pulsed-field electrophoresis (PFGE) were performed. Thirty-eight S. aureus were identified, 18 (47.36%) of organic dairy products and 20 (52.63%) of conventional dairy products. Among the 38 isolates, 34 isolates (89.47%) presented at least one enterotoxin producing gene, with seg in 25 isolates (65.79%), sei in 18 isolates (47.37%), seb in 7 isolates (18.42%), sej in 8 (21.05%), seh in 5 (13.16%) and no sea, sec, sed and see genes were detected. The agr I gene was found in 5 isolates (13.16%), agr II in 11 (29.0%), agr III in 17 (44.74%), agr IV in 3 (7.89%); it was not possible to identify agr in 2 isolates (5.3%). A total of 14 different spa types were identified, t021 was the most frequent type (8 isolates, 21.05%), t127 was found in 5 isolates (13.16%) and t1062 in 3 isolates (7.89%). Seventeen clusters were detected based on the PFGE technique, 1 cluster with 5 isolates, 1 with 4, 2 with 3, 4 with 2 and 9 with only 1. Of the 32 profiles 4 clusters presented 2 clones with similarity of 100%. The abundance of isolates was similar between conventional and organic dairy products. The results obtained in the PFGE corroborate the identification of the main transmission points of the S. aureus strains, such as brine, utensils (lira), raw and pasteurized milk used to produce Minas frescal cheese
Subject: Staphylococcus aureus
Queijo minas frescal
Enterotoxinas
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: CANDIDO, Talita Junia Silva. Fatores de virulência e subtipagem de Staphylococcus aureus isolados de laticínios orgânicos e convencionais no estado de São Paulo. 2018. 1 recurso online (84 p.). Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos, Campinas, SP.
Date Issue: 2018
Appears in Collections:FEA - Tese e Dissertação

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