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Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Envolvimento dos receptores P2X3 na hiperalgesia muscular : Involvement of P2X3 receptors in muscle hyperalgesia
Title Alternative: Involvement of P2X3 receptors in muscle hyperalgesia
Author: Aquino, Bruna de Melo, 1987-
Advisor: Oliveira, Maria Claudia Gonçalves de, 1979-
Abstract: Resumo: A contração muscular estática é o padrão de contração muscular mais associado às atividades de vida diária e laborais. A sustentação postural por longos períodos de tempo é capaz de induzir dor e inflamação local. Dados obtidos recentemente por nosso grupo de pesquisa demonstraram que a contração estática em ratos é capaz de induzir hiperalgesia muscular mecânica, modulada por diferentes mediadores inflamatórios, como bradicinina, aminas simpatomiméticas, prostaglandinas e neutrófilos. Demonstramos também que a ativação dos receptores P2X3 pelo ATP endógeno é essencial para o desenvolvimento da hiperalgesia muscular induzida pela contração estática, entretanto, os mecanismos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Assim sendo, o objetivo geral do presente estudo foi avaliar o envolvimento dos receptores P2X3, periféricos e do corno da raiz dorsal da medula espinhal, no desenvolvimento da hiperalgesia muscular de origem inflamatória induzida pela carragenina ou pela contração muscular estática via farmacologia comportamental utilizando-se o teste de Randall Selitto. Ainda, se o envolvimento dos receptores P2X3 na hiperalgesia muscular é modulado pela migração de neutrófilos, via quantificação da enzima mieloperoxidase (MPO). Os resultados demonstraram que o pré-tratamento com o antagonista seletivo de receptores P2X3, A-317491, via intramuscular ou intratecal, preveniu o desenvolvimento da hiperalgesia muscular induzida pela contração estática e pela carragenina (p<0.0001; ANOVA One way, Teste de Tukey) e a migração de neutrófilos no tecido muscular em ambos os modelos (p<0.05; Teste de Tukey). Esses resultados demonstram que a hiperalgesia muscular induzida pela contração estática e carragenina é modulada pelos receptores P2X3 periféricos e centrais e que esse processo é modulado, pelo menos em parte, pela migração de neutrófilos. Esses dados sugerem, portanto, que os receptores P2X3 são importantes alvos farmacológicos no controle das dores musculares de origem inflamatória. Por fim, paralelamente ao estudo principal demonstramos que a contração estática não induz aumento das citocinas inflamatórias TNF-?, IL-1? e IL-6 nas primeiras 24 horas após a contração, via ensaio imunoenzimático (ELISA) (p>0.05; Teste de Tukey). Além disso, apresentamos informações sobre o projeto "Desenvolvimento de Camundongos GCaMP6 para estudo dos mecanismos de dor e fadiga muscular" relativo ao período de doutorado sanduiche realizado na universidade de Utah, EUA, no qual demonstramos o processo de desenvolvimento de camundongos TRPV1-cre/GCaMP6+, capazes de expressar a proteína fluorescente GFP apenas nas fibras TRPV1+. Além disso, demonstramos os resultados da análise via calcium imaging das células do gânglio da raiz dorsal desses animais quanto à caracterização e a sua resposta a diferentes doses de metabólitos. Verificamos que 57,64% das células de cultura do GRD são de origem muscular e que destas 78% apresentam GFP, sendo que 1/3 delas não respondem a capsaicina. Demonstramos por fim, que 85,6% e 100% das células de origem muscular que respondem, respectivamente, ao pH 7.0 e 6.6, são TRPV1+, sugerindo, portanto, que os receptores neurônios TRPV1+ possuem um importante papel como mediador da resposta evocada por metabólitos na fadiga e na dor muscular

Abstract: Static contraction is the pattern of muscle contraction most associated with activities of daily living and work. Postural support for long periods of time is able to induce pain and local inflammation. Data obtained recently by our research group have demonstrated that static contraction in rats is capable to induce mechanical muscle hyperalgesia, modulated by different inflammatory mediators such as bradykinin, sympathetic amines, prostaglandins and neutrophils. We also demonstrated that the activation of P2X3 receptors by endogenous ATP is essential for the development of muscle hyperalgesia induced by static contraction, however, the mechanisms underlying are still unknown. Therefore, the general aim of the present study was to evaluate the mechanism by which activation of peripheral P2X3 receptors and those expressed in the dorsal horn of the spinal cord contributes to the development of inflammatory muscle hyperalgesia-induced by carrageenan or static contraction by behavioural pharmacology Randall Selitto test was used. Furthermore, if the involvement of P2X3 receptors in muscle hyperalgesia is modulated by neutrophil migration, by measurement of myeloperoxidase (MPO). The results demonstrated that intramuscular or intrathecal pretreatment with the selective antagonist of P2X3 receptors, A-317491, prevented the development of muscle hyperalgesia induced by static contraction and carrageenan (p<0,0001; ANOVA One way, Teste de Tukey) and prevented increase in neutrophil migration in muscle tissue in both models (p<0,05; Teste de Tukey). These results demonstrate that muscle hyperalgesia induced by static contraction and carrageenan are mediated by peripheral and central P2X3 receptors and that this process is modulated, at least in part, by neutrophil migration. Therefore, these data suggest that P2X3 receptors are important pharmacological targets to control inflammatory muscle pain. Finally, in parallel with the main study, we demonstrated that static contraction did not induce an increase in the inflammatory cytokines TNF-?, IL-1? and IL-6 in the first 24 hours after contraction, by immunoenzymatic test. In addition, we present information about the project "Development of GCaMP6 mice for the study of mechanisms of pain and muscular fatigue", related to the period of phD sandwich at the University of Utah, USA. We demonstrated the process of development of TRPV1-cre / GCaMP6+ mice, able of expressing a GFP fluorescent protein only in the TRPV1+ fibers. In addition, we demonstrated the results of calcium imaging analysis of dorsal root ganglion cells, such as the ability to express and respond to different doses of metabolites. We found that 57.64% of the GRD culture cells are DiI+ and that 78% of them have GFP, and that 1/3 of them were irresponsive to capsaicin. Finally, we showed that 85.6% and 100% of the cells of muscular origin, respectively, pH 7.0 and 6.6, are TRPV1 +, suggesting that TRPV1+ neurons play an important role in mediating metabolite evoked muscle fatigue or pain
Subject: Receptores purinergicos
Hiperalgesia
Inflamação
Neutrófilos
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: AQUINO, Bruna de Melo. Envolvimento dos receptores P2X3 na hiperalgesia muscular: Involvement of P2X3 receptors in muscle hyperalgesia. 2018. 1 recurso online (135 p.). Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas, Limeira, SP.
Date Issue: 2018
Appears in Collections:FCA - Tese e Dissertação

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