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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Methylation-sensitive high resolution melting (MS-HRM) analysis of SOCS1, P16 and TIMP2 genes in LPS-stimulated human gingival fibroblastos = Análise específica de metilação por melting de alta resolução (MS-HRM) dos genes SOCS1, P16 e TIMP2 em fibroblastos gengivais humanos estimulados por LPS
Title Alternative: Análise específica de metilação por melting de alta resolução (MS-HRM) dos genes SOCS1, P16 e TIMP2 em fibroblastos gengivais humanos estimulados por LPS
Author: Leite, Mayra de Faria França, 1982-
Advisor: de Souza, Ana Paula, 1975-
Abstract: Resumo: Objetivo: O papel do lipopolissacarídeo bacteriano (LPS) para desencadear a inflamação periodontal é bem conhecido. No entanto, o efeito do LPS na modulação do estado de metilação do DNA não está completamente claro. Aqui, investigamos o efeito do LPS de P. gingivalis no perfil de metilação da região reguladora dos genes SOCS1, P16 e TIMP2 em fibroblastos gengivais humanos cultivados, a fim de avaliar se o LPS pode alterar o estado de metilação desses genes. Material e Métodos: As células de fibroblastos gengivais humanos imortalizadas foram cultivadas em meio suplementado com LPS de P. gingivalis ou com o veículo do LPS de P. gingivalis durante 12, 24 e 48 horas. A seguir, a viabilidade celular foi avaliada por teste de MTT. O DNA genômico foi isolado e convertido por bissulfito de sódio. O estado de metilação da região reguladora dos genes P16, SOCS1 e TIMP2 foi analisado por PCR específica de metilação seguida por análise de melting de alta resolução (MS-HRM). Resultados: Tanto fibroblastos estimulados por LPS quanto os fibroblastos tratados apenas com o veículo do LPS não mostraram diferenças significativas na região analisada dos genes P16, SOCS1 e TIMP2 durante os períodos de 12, 24 e 48 horas. Conclusão: Pequenos períodos de estimulação com LPS não foram suficientes para promover alterações de metilação nas regiões analisadas dos genes SOCS1, P16 e TIMP2 em fibroblastos. Relevância clínica: Compreender o papel das moléculas derivadas de periodontopatógenos na promoção de alterações de metilação dentro da região reguladora de genes-chaves associados à periodontite é importante para aumentar o reconhecimento da área e pode abrir portas para o desenvolvimento de novas terapias adjuvantes

Abstract: Objective: The role of bacterial lipopolysaccharide (LPS) to trigger periodontal inflammation is well known. However, the effect of LPS in modulating the methylation status of DNA is not completely clear. Here, we investigated the effect of P. gingivalis LPS on the methylation profile of regulatory region of SOCS1, P16 and TIMP2 genes in cultured human gingival fibroblast in order to assess whether LPS can alter the methylation status of these genes. Material and Methods: Immortalized human gingival fibroblast cells were cultured in medium supplemented with P. gingivalis LPS or P. gingivalis LPS vehicle during 12, 24 and 48 hours. Following, cell viability was assessed by MTT test. Genomic DNA was isolated and converted by sodium bisulfite. The methylation status of the regulatory region of P16, SOCS1 and TIMP2 genes was analyzed by methylation specific PCR followed by high resolution melting analysis (MS-HRM). Results: Either fibroblast LPS-stimulated or fibroblast treated only with vehicle did not show significant differences in the analyzed region of P16, SOCS1 and TIMP2 genes during the periods of 12, 24 and 48 hours. Conclusion: Short periods of LPS stimulation were not enough to promote methylation changes in the analyzed regions of SOCS1, P16 and TIMP2 genes in fibroblasts. Clinical Relevance: Understanding the role of molecules derived from periodontopathogens in promoting methylation changes within regulatory region of key genes associated with periodontitis is important to increase the area acknowledgment and can open doors to the development of new adjuvant therapies
Subject: Epigenética
Metilação de DNA
Lipopolissacarideos
Fibroblastos
Editor: [s.n.]
Citation: LEITE, Mayra de Faria França. Methylation-sensitive high resolution melting (MS-HRM) analysis of SOCS1, P16 and TIMP2 genes in LPS-stimulated human gingival fibroblastos = Análise específica de metilação por melting de alta resolução (MS-HRM) dos genes SOCS1, P16 e TIMP2 em fibroblastos gengivais humanos estimulados por LPS. 2017. 1 recurso online ( 33 p.). Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Piracicaba, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/331391>. Acesso em: 1 set. 2018.
Date Issue: 2017
Appears in Collections:FOP - Tese e Dissertação

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