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Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Solubilização parcial de membranas de eritrócitos e de sinaptossomas induzida por detergentes não iônicos
Title Alternative: Partial solubilization of the erythrocyte and synaptosome membranes induced by nonionic detergents
Author: Casadei, Bruna Renata, 1986-
Advisor: Paula, Eneida de, 1963-
Abstract: Resumo: Lipids rafts são microdomínios, da ordem de 10 a 200 nm, enriquecidos em esfingolipídios, colesterol e proteínas específicas, responsáveis por diversos processos celulares e que possuem características similares à fase líquido-ordenada (Lo) encontrada em membranas modelo. Esses microdomínios têm sido estudados através do preparo de membranas resistentes à detergentes (DRMs). Neste trabalho nós investigamos a ação de detergentes não iônicos em duas membranas biológicas (de eritrócito humano e de sinaptossomas de córtex cerebral suíno) e a obtenção de DRMs com o fim de identificar os mecanismos determinantes da associação entre os componentes das membranas biológicas, que levam a separação lateral de fases. Medidas em monocamadas de Langmuir e em bicamadas (vesículas unilamelares gigantes, GUVs) com lipídios extraídos de membranas eritrocitárias possibilitaram avaliar a cinética de incorporação e o processo de solubilização induzido pelos detergentes TX-100 e Brij 98. Nessas membranas, o TX-100 foi capaz de separar domínios de fase Lo e, em concentrações acima da concentração micelar crítica (CMC), solubilizar a fração líquido-desordenada, enquanto o Brij 98 ¿ de maior afinidade pelos lipídios que o TX-100 - em concentrações menores que a CMC, já foi capaz de fragmentar a membrana em microvesículas. Numa segunda abordagem experimental, utilizamos sinaptossomas de córtex cerebral suíno. O tratamento dessas biomembranas com TX-100 ou Brij 98, levou a obtenção de DRMs tanto à 4 quanto à 37 ºC; as frações resistentes a TX-100 mostraram-se enriquecidas em colesterol e esfigomielinas, enquanto as DRMs de Brij 98 continham maior teor proteico e de fosfolipídios, e menor conteúdo de colesterol. O elevado teor de colesterol nas DRMs de TX-100 concorda com seu maior empacotamento lipídico, em relação às DRMs de Brij 98. Os resultados mostram que a composição de DRMs é totalmente dependente do detergente, indicando um processo de solubilização diferencial dos componentes da membrana eritrocitária e sinaptossomal induzido pelo TX-100 e pelo Brij-98. Desta forma, considerando a composição, o tamanho e a presença da fase Lo nos DRMs de TX-100, concluímos que este detergente não iônico é capaz de isolar mais eficientemente os microdomínios lipid rafts dessas duas biomembranas modelo

Abstract: Lipids rafts are 10-200nm microdomains found in biological membranes, which are enriched in cholesterol, sphingolipids and specific proteins, being related to diverse cellular processes such as fusion, endocytosis,¿ Lipid rafts have properties also found in the liquid ordered (Lo) phase of model membranes. One approach to study such microdomains is offered by detergent resistant membranes (DRMs). In this thesis we have investigated the effect of non-ionic detergents in two biomembranes (human erythrocytes and pig brain cortex synaptosomes) and the preparation of their DRMs in order to identify the mechanisms that rule the association between membrane components, leading to phase separation. Studies with lipids extracted from erythrocyte membranes (Langmuir monolayers and giant unilamellar vesicles, GUV) allowed determination of the kinetics of membrane insertion and solubilization process induced by TX-100 and Brij 98. In such membranes, TX-100 was able to induce the formation of Lo phase resistant fractions and, above its critical micelle concentration (CMC), to solubilize such domains. As for Brij 98, which binds stronger to the membrane lipids, even below the CMC it disrupted the membranes in microvesicles (DRMs). We have also prepared synapsomal membranes from pig brain cortex. Treatment of such membranes with TX-100 or Brij 98 gave rise to DRMs, both at cold (4 ºC) and at 37 ºC; the TX-100 resistant fractions were enriched in cholesterol and sphingolipids, while the Brij 98 DRMs contained higher protein and phospholipid levels and low cholesterol content. The higher cholesterol level of the TX-100 DRMs agreed well with their improved lipid packing, detected by Electron Paramagnetic Resonance, in comparison to Brij 98 DRMs. In conclusion, the differential solubilization of erythrocyte and synaptosomal membrane components induced by TX-100 and Brij 98 show that is mainly the surfactant agent that determines DRMs composition. More specifically, considering the composition, size and presence of the Lo phase in TX-100 DRMs we conclude that this detergent is able to more efficiently isolate lipid rafts microdomains from the two model biomembranes studied
Subject: Membranas
Eritrócitos
Sinaptossomas
Detergente
Microdomínios da membrana
Editor: [s.n.]
Citation: CASADEI, Bruna Renata. Solubilização parcial de membranas de eritrócitos e de sinaptossomas induzida por detergentes não iônicos. 2015. 1 recurso online (104 p.). Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/314149>. Acesso em: 28 ago. 2018.
Date Issue: 2015
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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